细胞培养培养板的操作步骤如下：

　　1.加样品：将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔)，将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。

　　2.加对照：加入阴性对照1-3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

　　3.温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。

　　4.洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。(1)手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。(2)机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。

　　5.加酶标工作液：每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。

　　6.显色和终止反应：将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。

　　结果判定

　　1.酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。

　　2.当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照(pc)OD值大于0.30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。

　　3.临界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。

　　4.标本OD值≤临界值为阴性，标本OD值>临界值为阳性。

　　常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。