sirna转染实验步骤（以 24 孔板为例）

1． 接种细胞

对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为60%-80% 为佳。

对于悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，用PBS清洗细胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞，在24孔板中进行细胞铺板，细胞密度为60-80%。

2． 准备转染试剂-siRNA复合物（或转染试剂-miRNA复合物）

(1) 对于每孔细胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL离心管中，加入2 μL转染试剂与siRNA 混合，室温孵育3 min。

(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀，在室温下静置30 min，形成转染试剂-核酸复合物。

(3) 30 min后，往上述复合物中加入250 μLOpti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀。

3． 转染细胞

(1) 细胞用PBS清洗1-2次，将上述350µL转染试剂-siRNA复合物加入每孔细胞。

(2) 在 37℃，5% CO2 培养箱培养 24-48 h，无需更换新的培养液，之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。注：可在转染12h后补充500 μL完培养基 (含血清)。

siRNA转染试剂推荐

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