脂质过氧化是脂类的氧化降解过程，其主要由活性氧类（ROS）引发。脂质过氧化传感器（Lipid Peroxidation Sensor）是通过一种 C11-BODIPY 581/591 试剂的氧化来检测活细胞中的脂质过氧化情况。 C11 BODIPY 581/591 本质上是一种亲脂荧光染料，具有良好的光稳定性、低荧光伪影特质，能积累在膜内。 一旦染料的多不饱和丁间二烯基被氧化，荧光最大发射波长峰值从约 ∼590 nm 偏移至约 ∼510 nm，活细 胞的荧光从红色变为绿色，但仍维持亲脂性，从而反映膜的脂质过氧化水平。这种传感器通常用于荧光显 微镜和流式细胞分析中，可视化监测脂质 ROS 的生成和动态变化。

测定原理

LPO在酸性条件下加热，产生小分子终产物 MDA，MDA与TBA，生成红色产物，在 535nm有最大吸收峰。

使用方法

1. 流式细胞分析：

(1) 悬浮细胞：800 g 离心5 min 收集细胞沉淀；随后PBS 洗涤细胞两遍。

(2) 贴壁细胞：弃培养液，用常温PBS 或培养液轻洗细胞2 次，随后胰酶消化，800g 离心5 min 收集细胞沉淀，随后PBS 洗涤细胞两遍，每个样本收集1~5 ×105 个细胞。【注】：操作过程中轻柔吹打细胞，消化时间不宜过长，剧烈吹打或胰酶消化过度会影响实验结果。

(3) 脂质过氧化传感器用于脂质过氧化检测的推荐浓度为终浓度5μM；配制方法：用新鲜空白培养液配制终浓度为5μM 的脂质过氧化传感器染色液待用，DMSO 含量≤5‰。【注】：该步操作建议在消化细胞前准备好，以免细胞消化后久置影响实验结果。

(4) 将事先配置好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中，推荐体积为500μL，随后置于37℃孵箱，染色30min，期间5-10min 间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。

(5) 染色结束后，800 g 离心5 min，弃上清，随后用PBS 清洗细胞2 次，加入200μLPBS 重悬细胞用于流式分析。

2. 原位成像：

(1) 接种适当密度的细胞于20mm 规格的盖玻片上（也可用共聚焦小皿替代），给予实验药物处理适当时

(1)间后，吸去培养液，用PBS 洗涤细胞一遍；加入500 μL 配制好的脂质过氧化染色液，于37℃染色30min；配制方法参考流式分析中的染色液配制。

(2) 弃培养液，PBS 洗涤细胞两遍后于荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在1 h

(2)之内完成检测。

检测条件

该分子探针在还原状态下最佳激发波长为 581 nm, 发射为 591nm；被 Lipid ROS 氧化后最佳激发波长 为 500 nm，发射在 510nm。因此，在流式分析中检测通道为 FL1-A；激光共聚焦检测：氧化态激发波长可 选 488nm（FITC）通道；还原态激发波长可选 561 nm（TRITC）通道。

注意事项

1、临用前注意试剂二是否溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

2、使用前小心离心数秒取用，需佩戴手套操作，注意避免与皮肤、眼睛和黏膜接触。