Alexa Fluor 647-Phalloidin, Alexa Fluor647 标记鬼笔环肽

产品描述

鬼笔环肽是从一种菌类Amanita Dhalloides所提取出来的环肽。它与F-actin竞争性的结合。荧光标记的鬼笔环肽在纳克水平就可与F-actin选择性的结合并且易溶于水，为检测组织切片，培养细胞和无细胞体系中的actin的定位和定量提供了非常方便的标记方法。

本品为Alexa Fluor647标记的鬼笔环肽，可发出高亮度、稳定的远红外荧光，染色反应特异性强，对比性高，适合用作F-actin的定性和定量检测。与Actin抗体比较，Alexa Fluor647 鬼笔环肽具有如下优点：1）与actin亚单位一比一结合，并且不与G-actin结合，具有比Actin抗体更好的染色效果；2）且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛；3）鬼笔环肽标记的非特异性信号可忽略，因而图像的反差较好；4）染色与用于细胞分析的其他荧光染色*兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他Alexa Fluor偶联物（包含Alexa Fluor偶联二抗）；5）经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。

技术资料

1. Ex(nm)：650

2. Em(nm)：665

3. 分子量：约2200

4. 溶剂：DMSO

5. 结构式：

运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法：

1.   准备1000x DMSO Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽存储液

用301µL DMSO 溶解粉末状Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽，可按需分装并于-20℃避光干燥保存，分装保存，避免反复冻融。

2.   准备1x Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽存储液到1ml 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注意：不同的细胞染色状况不同，相应Alexa Fluor 647鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

3. 细胞染色步骤

1）细胞培养过夜或更长，使其密度达到50-60%汇合度。

2）吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3）使用含有3-4%甲醛的PBS溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4）室温条件下，用PBS清洗固定好的细胞2~3次，每次10min。

5）（可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5min，从而增加其通透性。

注意：鬼笔环肽的分子量小，很容易通过细胞，一般情况下不需对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。

6）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7）每孔加入 Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽工作液100µl/孔（96孔板），室温避光染色20-90min，夏季时间相对短些。

8）用PBS清洗细胞3次，每次5min，去除掉多余的Alexa Fluor 647标记鬼笔环肽。

9）（可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100µl/孔（96孔板），室温3~5min。用PBS清洗细胞2次，每次5min。

10）于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择Alexa Fluor 647激发/发射滤片（Ex/Em=650/665nm）和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。