Hoechst 33342 *超级纯*

产品描述

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 系列染料因与DNA结合的特性，也常被用来进行线粒体DNA的观察。

Hoechst33258和Hoechst33342是两种非常相近的Hoechst染料，他们都在紫外段350 nm被激发，发射波长都为461 nm，两种染料经常被用来替代另一种荧光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，在部分实验中Hoechst33258的细胞透过性存在明显不足。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33342工作终浓度为0.5～5 μM，在一些敏感性实验时，建议设置多个染色浓度，以获得需要的染色效果。

订购信息

技术参数

　　光学性质：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

　　化学参数：分子量：561.93  溶剂：Water        CAS：23491-52-3

保存方法

　　冰袋（wet ice）运输，-20℃干燥避光保存，保质期12个月。

使用方法

1. 缓冲液制备。用PBS或合适的缓冲液制备10～50 μM Hoechst 33342染色液。李记生物也提供配制好的20 mM Hoechst 33342（CAT:AC12L021）产品，既方便存放，以方便稀释备用。

2. 固定的细胞或组织染色。对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。依次按步骤进行免疫荧光染色，和Hoechst33342染色。如果不进行免疫荧光染色，则直接按步骤进行Hoechst33342染色。

（1）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3~5 min。

（2）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2~3次，每次3~5 min。

（3）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长461 nm。

3. 活细胞或组织染色

（1）细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。

（2）在37℃培养细胞10～20 min。

（3）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

（4）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长461 nm。

注意事项

1. Hoechst 33342溶于水，溶解度可达20mM(约10mg/ml)。您也可直接购买20 mM的液体规格产品（货号:AC12L021）。

2. Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

3. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

4. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。