潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418 (Cat：AB11L234)，Zeocin（Cat：AB11L251）和Blasticidin S（Cat：AB11L221）联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入yin病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

订购信息

运输与保存

常温运输。4℃保存，有效期48个月。

技术参数

1.CAS：31282-04-9

2.溶解性：100mg/ml in Water

3.纯度：≥90%

4.酶活/效价：≥950U/mg

5.结构式：

使用方法

1.常用筛选浓度

【注】：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2.杀灭曲线的建立

【注】：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zui低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

（1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

（2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

（3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

（4）接下来每3-4 d更换新的含药物培养基。

（5）按照固定的周期（如每2 d）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10 d）内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

（3）稳定转染细胞的筛选

（1）转染48 h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

【注】：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，将细胞稀释至丰度不超过25%。

（2）每隔3-4 d更换含有药物的筛选培养液。

（3）筛选7 d后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

（4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7 d。

（5）之后更换正常培养基培养即可。

注意事项

1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

3.本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.以上数据均来自公开文献, 李记生物暂未本产品进行独立验证, 仅供参考。