PI 凋亡检测试剂盒产品详情

 
产品说明：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为 35.8 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将 FITC-Annexin V 与 PI 匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

操作方法：

1、 用 27ml 的去离子水稀释 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每次用 3ml。

2、 收集细胞（1×106 个/次），然后用冷的 PBS 洗涤。（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗涤）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 悬浮细胞，300×g 离心 10min，弃上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重悬细胞，使细胞的密度达到 1×106 个/ml。

5、 每管加入 100μL 细胞（1×105 个）。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室温，避光，轻轻地混匀，10min。

8、 加入 5μL PI，室温，避光，孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL，轻轻混匀。

10、在 1 小时内用流式细胞仪检测。1、 用 27ml 的去离子水稀释 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每次用 3ml。

2、 收集细胞（1×106 个/次），然后用冷的 PBS 洗涤。（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗涤）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 悬浮细胞，300×g 离心 10min，弃上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重悬细胞，使细胞的密度达到 1×106 个/ml。

5、 每管加入 100μL 细胞（1×105 个）。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室温，避光，轻轻地混匀，10min。

8、 加入 5μL PI，室温，避光，孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL，轻轻混匀。

10、在 1 小时内用流式细胞仪检测。
 

注意事项：

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。

3、Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。

4、在细胞洗涤的后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留影响实验结果

5、PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首行 Annexin V-FITC 染色，上机前 5分钟再加入 PI 染色。

6、整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在 4℃下操作。

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