谷氨酸合成酶(GOGAT)检测试剂盒测定意义

产品说明：
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的前质体中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。GOGAT 以 NADH 为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸，NADH 在 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。

测定意义：GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
测定原理：GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
 

试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
 

操作步骤：
一、粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
 

二、测定步骤：
1、紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、工作液提前配置，平衡至室温。

注意事项：
1、测定期间样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、尽量两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
3、当 A1 大于 1.5 或者∆A 大于 0.6 时，建议将样品用蒸馏水稀释后测定，当∆A 过小时，可以延长酶促反应时间（10min 或 15min）或者加大加入的样品体积进行测量。
4、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量

谷氨酸合成酶(GOGAT)检测试剂盒测定意义