组织细胞蛋白提取试剂盒原来是这样使用的

描述：从组织细胞中提取总蛋白是 Western Blot 的关键步骤。实体软组织如脑脊髓富含磷脂，神经xue管含大量结缔组织，而脂肪则含有大量油脂，常规的方法难以有效从这些组织中提取蛋白。本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整的解决方案。用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心、干燥后即可得到总蛋白。蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量。提取过程可在 30-60 分钟内完成，可在 1.5mL 离心管微量提取也可大规模制备，极为简便高效。

规格： 50次  100次

储存：室温或4ºC   24个月有效

固体组织蛋白提取

1. 每 10-100mg 固体组织剪碎后加入 0.5-1 mL 裂解液，放入玻璃匀浆器内上下手动匀浆 15 次；或用高速机械匀浆器 12,000 rpm破碎组织。少量小的未破碎组织不影响后续抽提。注意：肝肾脾组织蛋白含量高，提取时应加较少量的组织，一般不超过50 mg，否则形成的蛋白膜厚、致密且难溶。

2.仅取 0.5mL 组织匀浆液转移到 1.5mL 离心管，弃去剩余的组织匀浆液。每 0.5mL 组织匀浆液加入2倍体积的(1mL)抽提试剂充分混匀。室温或 4ºC 静置 10 分钟，偶尔晃动。注意：(1)如组织量<10mg，在下一步离心时形成的蛋白膜易碎，静置 30min 有助蛋白膜形成。(2)提取脂肪组织时应 4ºC 静置 40min 以上以充分去除油脂。(3) 0.5mL 组织匀浆液获得的蛋白足以进行几十次 Western Blot。保证每 0.5mL 组织匀浆液加入 2 倍体积的(1 mL)抽提试剂是成功的关键。

3.10,000 × g 4ºC 离心 10 分钟，溶液分为上下两相，两相中间为蛋白膜。吸除上层液体；随后用吸头或针头轻轻拨开蛋白膜，吸除下层液体。蛋白膜将附着于离心管壁。注意：(1)离心速度过高将使蛋白膜过于坚固，难以溶解。(2)如果不 能分相，可再加入 50μl 蒸馏水混匀离心。 (3)如果初始组织量较少(<10mg)，离心后难以得到完整的蛋白膜，此时可吸

3.去上下层液体，加入 1mL 纯乙醇混匀，10,000 × g 4ºC 离心 3 分钟。弃所有液体，蛋白沉淀在管底。

4.敞开管口，室温空气干燥沉淀。未溶解的蛋白沉淀不含盐、去垢剂、和还原剂成分，可 4ºC 或－20ºC 一年以上。

 
说明

1.按照上述提取和溶解过程，不加蛋白酶抑制剂，而蛋白不会有明显降解，用户不必(但可以)加入蛋白酶抑制剂。

2.蛋白定量。注意使 SDS 浓度稀释到不影响蛋白定量的水平，或选择不受 SDS 影响的 BCA 定量方法。BCA 法<5% SDS浓度，Bradford 法<0.125% SDS 浓度。

3.按比例可进行大规模的(多至1 g) 组织蛋白提取。提取试剂对眼睛和呼吸系统有一定刺激性，皮肤不慎接触可用水清洗。

 
组织细胞蛋白提取试剂盒原来是这样使用的