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| 产品名称： | 大鼠辅肌动蛋白α2 (ACTN2)elisa试剂盒 | ||||||
| 英文名称： | Rat ACTN2 (Actinin Alpha 2) elisa Kit | ||||||
| 规格： | 48T/96T | ||||||
| 产品保质期： | 6个月 | ||||||
| 保存条件： | 2-8度 | ||||||
| 该试剂盒操作原理： | |||||||
| 本试剂盒含量是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系 | |||||||
| 我们在做ELISA实验的时候，通常选取血液样本为我们的代测样本，具体收集方法如下： | |||||||
| 血液样本的收集： 全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。 | |||||||
| 大鼠辅肌动蛋白α2 (ACTN2)elisa试剂盒 | |||||||
| 我们在选择抗凝剂的时候，有几点需要注意的： | |||||||
| ①、每一份样本所加的抗凝剂的量要*，同时所取的全血的量也要尽量*; ②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固; ③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）; ④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后 用于测定。 | |||||||
| 组织样本也是我们经常使用到的，动物组织样本的前处理，匀浆方法如下： | |||||||
| 动物组织样本的前处理: 1、取组织块（0.1g～0.2g）在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，准确称重，放入匀浆管中。 2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（使用0.86%的生理盐水）于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。 3、匀浆的方式有多种：手工匀浆，机器匀浆，超声粉碎。 ①、手工匀浆：将玻璃匀浆管置于冰水浴条件下，手动匀浆，30秒/次，间隔30秒，重复6～8次，制成10%的匀浆液。 ②、机器匀浆：用机械式匀浆机（组织捣碎机或内切式匀浆机），8000～10000转/分，冰水浴条件下，10秒/次，间隙30秒，连续3～5次。（皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间） ③、超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。 镜检观察:取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。 4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定.（测定相应指标的同时需测一下相应样本的蛋白浓度，总蛋白测试盒本所有售） | |||||||
| 大鼠辅肌动蛋白α2 (ACTN2)elisa试剂盒 | |||||||
| 我们销售的试剂盒的具体操作简单的特点，具体步骤如下（试剂盒已经包含了所有试剂，自备仪器为酶标仪，洗板机，温育箱，移液器）： | |||||||
| 1. 加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50微升不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 | |||||||
| 2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 | |||||||
| 3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 | |||||||
| 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 | |||||||
| 5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 | |||||||
| 6. 温育：操作同3。 | |||||||
| 7. 洗涤：操作同5。 | |||||||
| 8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. | |||||||
| 9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 | |||||||
| 10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 | |||||||
| 大鼠辅肌动蛋白α2 (ACTN2)elisa试剂盒 | |||||||
| 我们销售的试剂盒性能稳定： | |||||||
| 试剂盒性能我们是通过几个数值反应的：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批间分别小于9%和11% | |||||||
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