呋喃唑酮代谢物ELISA检测试剂盒样本处理前须知

处理任何样本时，都必须注意：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。

（c）衍生化试剂可于2-8℃保存半年。

（d）磷酸氢二钾溶液可于2-8℃保存三个月

（e）盐酸溶液可于室温保存三个月

（f）氢氧化钠溶液可于室温保存三个月

（g）未处理的样本冷冻保存。

（h）处理好的样本可在2-8℃避光保存24小时。

（i）鸡蛋样本前处理过程中，50℃水浴2小时，中间每半小时必须用振荡器剧烈振荡1-2分钟，它直接影响结果的准确性。

（一）肌肉、肝脏组织前处理方法

┅┅用均质器均质样本；

┅┅接（四）的描述方法。

注：样本应当在阴凉避光处冷藏保存

（二）牛奶前处理方法

┅┅取牛奶样本，3000g以上，10℃离心10min，吸除上层脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中；

┅┅分别加入250ml C液和250ml D液（见配液3）；

┅┅用振荡器充分振荡混合，3000g以上，4~12 oC（39-54℉）离心10min。如果没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 oC（46℉），然后离心；

┅┅接（四）的描述方法

（三）蜂蜜前处理方法

┅┅称取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯离心管中；

┅┅用4ml去离子水，用振荡器振荡至蜂蜜全部溶解；

┅┅加入0.5ml 1M盐酸溶液（见配液4）和100ml衍生化试剂（见配液1），用振荡器充分振荡；

┅┅接（四）第二步描述方法（标 * 处）。

（四）接上面的方法

┅┅称取1.0±0.05g均质后的组织样本（肝样/肉样）、制备好的牛奶样本上清液1.1ml（相当于1ml的奶样），分别加入4ml的去离子水、0.5ml 1M 盐酸溶液（见配液4）和100ml衍生化试剂（见配液1），用振荡器充分振荡2min；

*┅┅在37 oC过夜孵育（大约16h）；

┅┅分别加入5ml 0.1M 磷酸氢二钾溶液（见配液2）、0.4ml 1M 氢氧化钠溶液（见配液5）和5ml乙酸乙酯，用振荡器剧烈振荡30s；

┅┅3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；

┅┅取2.5ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃试管中，于50～60℃氮气流下吹干；

┅┅加入1ml正己烷（或正庚烷），用涡旋仪涡动30s，再加入1ml复溶工作液（见配液6），用涡旋仪涡动1min充分混匀；

┅┅3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；

┅┅除去上层有机相，取下层水相50µl用于分析。

（五）鸡蛋前处理方法

┅┅用均质器低速均质样本（蛋黄或全蛋）；

┅┅称取2.0±0.05g均质过的蛋样本至10ml聚苯乙烯离心管中，分别加入4ml去离子水、0.5ml 1M 盐酸溶液（见配液4）、200µl C液（见配液3），用振荡器振荡1min混匀；

┅┅加入200µl D液（见配液3），用振荡器充分振荡5min，3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；

┅┅取全部上清液至15ml聚苯乙烯离心管中，加入200µl衍生化试剂（见配液1），用振荡器充分振荡，50℃水浴2h（中间每半小时用振荡器剧烈振荡1-2分钟）；

┅┅分别加入5ml 0.1M 磷酸氢二钾溶液（见配液2）、0.4ml 1M 氢氧化钠溶液（见配液5）5ml乙酸乙酯，用振荡器剧烈振荡30s，3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；

┅┅取2.5ml上层有机相，于50～60℃氮气流下吹干；

┅┅加入1ml正己烷（或正庚烷），用涡旋仪涡动30s，再加入2ml复溶工作液（见配液6），用涡旋仪涡动1min充分混匀；（如出现乳化现象，请于60℃水浴中加热5min，再重复离心）；

┅┅除去上层有机相，取下层水相50µl用于分析。

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留的AOZ经衍生化后和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃唑酮代谢物的残留量