一、背景

呼吸机引起的肺损伤 （VILI） 是急性肺损伤 （ALI） 或急性呼吸窘迫综合征 （ARDS） 患者最常见的并发症之一。虽然p120是调节细胞连接的重要蛋白质，但应探索预防和治疗VILI的进一步机制。

二、方法

用p12小干扰（si）RNA，p120 cDNA，野生型E-钙粘蛋白并列膜结构域或K120R突变并列膜结构域（K83R-JMD）转染的小鼠肺上皮细胞（MLE-83）进行20%循环拉伸2或4小时。此外，用c-Src抑制剂PP预处理的MLE-12细胞和小鼠2或RhoA抑制剂Y27632，分别经历20%的循环拉伸或机械拉伸。此外，野生型C57BL / 6小鼠在机械通气前转染p120 siRNA-脂质体复合物。然后分析细胞裂解物和肺组织以检测肺损伤。

三、结果

20%活性c-Src的循环拉伸，诱导E-钙粘蛋白，p120和封闭素的降解。然而，p120的缺失增加了E-钙粘蛋白的降解和内吞作用。免疫沉淀和免疫荧光结果显示p120和E-钙粘蛋白之间的关联降低，而p120 siRNA和K83R-JMD组在20%循环拉伸后间隙形成增加。p120的缺失还降低了闭塞素水平，并通过增强RhoA活性降低了闭塞素和ZO-1的关联。然而，封闭素和E-钙粘蛋白水平的改变被PP逆转2或Y27632处理与循环拉伸组相比。一致地，p120过表达组在20%循环拉伸后，连接蛋白的表达、再分布和解离均恢复。此外，p120在机械通气下通过增加湿/干称重比和增加p120耗尽小鼠细胞因子（肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-六）的产生来证实p<>在VILI中的作用。

细胞机械循环拉伸

图1

环状拉伸对粘附连接蛋白和紧密连接蛋白的影响。将柔性细胞板上的MLE-12细胞单层经受20%循环拉伸2或4小时。 （a）蛋白质印迹显示p120，E-钙粘蛋白和封闭素在循环拉伸后减少。（b） 提取膜和细胞质蛋白。通过蛋白质印迹测定E-钙粘蛋白在膜和细胞质中的表达。周期性拉伸可诱导E-钙粘蛋白内吞作用。（c）免疫荧光染色和定量数据显示p120和E-钙粘蛋白在循环拉伸下结合。固定MLE-12细胞并用抗p120和抗E-钙粘蛋白染色，然后用Alexa偶联的二抗染色。（d）肌动蛋白细胞骨架重塑是通过用德克萨斯红偶联鬼笔环肽（红色）进行免疫荧光染色来确定的。由循环拉伸引起的细胞间隙用箭头标记。细胞核（蓝色）用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色。比例尺 = 10 μm。*p < 0.05 与对照组相比，+p < 0.05 与 CS 2 h 组相比。实验至少重复三次

四、结论

p120通过调节粘附和紧密连接来防止VILI。p120通过增加p120与E-钙粘蛋白的并列膜结构域之间的关联来抑制E-钙粘蛋白内吞作用。此外，p120通过抑制RhoA活性来减少闭塞素的降解。这些发现说明了p120预防VILI的进一步机制，特别是对于ALI或ARDS患者。

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