一.仪器

  液相色谱仪，紫外检测器；离心机_；旋转蒸发仪；K-D浓缩器。

二.试剂

  激素标准贮备液：分别称取雌三醇、雌二醇、雌酮、睾酮、孕酮0.1000g，用甲醇溶解并定容至100mL，每毫升含各种激素均为1.000mg。

  激素标准使用液：精密吸取一定量的激素标准品和内标贮备液，用甲醇配制成每毫升含各种激素为10.00μg、an眠酮2.00μg和每毫升含各种激素2.00μg、an眠酮2.00μg的两种标准使用液。

三.实验步骤

  1.样品的处理

  取可食部分，捣成均浆，称取50g左右置250mL具塞三角瓶中。在上述样品中加入an眠酮20.00μg/mL的内标贮备液1.0mL，加甲醇+丙酮（1+1）混合溶液150mL，在振荡器上振摇提取30min。用快速滤纸过滤，残渣用少量甲醇+丙酮（1+1）混合液洗涤数次，洗液并入滤液中，于旋转蒸发仪或K-D浓缩器中将溶剂蒸除。残渣用甲醇20mL溶解，经盛有无水硫酸钠的漏斗滤入250mL分液漏斗中，再用10mL甲醇分数次洗涤漏斗及内容物，洗液并入滤液中，加pH=5.2的醋酸钠缓冲液80mL左右，混匀后二氯甲烷50mL、30mL、30mL振摇提取3次。合并提取液并用无水硫酸钠脱水，在水浴上挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至10.0mL，混匀后，以3000r/min速度离心5min，取上清液供色谱分析用。

  2.液相色谱参考条件 

  ① 色谱柱：HP-ODS 4.6mm×200mm。

  ② 流动相：乙腈+甲醇+四氢呋喃+0.01mol/L 醋酸钠溶液（20+20+10+50）。

  ③ 流速：1.0mL/min。

  ④ 测定波长：270nm。

  ⑤ 进样体积：10μL。

  3.样品测定

  取供色谱测定的样品溶液10μL，注入液相色谱仪，以内标法定量。