梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。气相色谱中为改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

　　梯度洗脱原理是流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

　　梯度洗脱可提高柱效，改善检测器的灵敏度。当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

　　梯度液相色谱仪洗脱应满足以下要求：

　　1.洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不致于太拥挤。

　　2.梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。

　　3.梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。

　　目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。