DNA快速脱保护剂仪器使用方案讨论
时间:2019-06-20 阅读:1770
全自动寡核苷酸合成的脱保护步骤对合成时间和产品质量非常重要。为了提高合成速度、纯度和产率,我们经常使用如下几种快速脱保护试剂。
1. 用dC(ac)代替dC(bz) —— Beckman 认证方法
Acetyl-protected phosphoramidtes的特征:
- 超速脱保护(65℃时10 min)
- 寡核苷酸合成中是关键成分
- 工业标准
- 使用AMA方法时不变化
- 纯度与操作非常相关
- 在认证的ISO 9001质量系统下操作
2. TAC试剂
在温和条件下,用含TAC保护基代替标准保护基可使脱保护反应加速(在温和条件下),适用于含有base-labile单体的寡核苷酸。
TAC的特征:
- TAC基团的脱保护速度很快,在有浓氨条件下,55℃ 15min或在室温中2 h。
- 与AMA脱保护试剂兼容(AMA是一个混合物,含有大于25%的氨溶液和40%的jia胺)
- 在乙腈中易溶。不需要加入混合溶剂,如二甲基甲酰胺或二氯甲烷。
- 适用于含有活泼基的低聚体合成,如燃料和修饰物。
- DNA合成中不变化是必要的条件,除快速脱保护试剂Cap A代替Cap A。
- 应用dA(tac)可以提高寡核苷酸的质量.
3. dG(dmf)方法
改变二甲基jia胺(dmf)dG的保护基可以加速合成高纯度、高产率的寡核苷酸。因此也提高了高通量的产量。
dG的特征
- dG(dmf)脱保护的速度比传统dG(ib)快,在浓氨中脱保护的时间是55℃ 2 h,65℃ 1 h。
- dG (dmf)-单体适用于G多的序列;与传统的dG(ib)比较,未脱保护率被极大地降低了。
- dG (dmf)-amidite在溶液中与dA(bz)、dC(bz)、dT一样稳定。
- dG(dmf)amidite可以直接替代dG (ib)-amidite
- 在DNA合成中没有改变是必须的条件,除有低浓度的iocline oxidizer,如0.02 Miocline, 存在。
4. 替代dC保护基
改变TAC dC的保护基可以加速合成高纯度、高产率的寡核苷酸。用dC (tac)代替dC (bz)可以加快AMA脱保护的速度,提供高通量寡核苷酸的合成。
dC的特征
- 用AMA脱保护可以加速,*脱保护需要10 min,在65℃条件下。
- C-单体的副反应通过转氨作用被消除。
- 对一些修饰过的核苷酸都可用。
- dC (tac)-amidite可以直接替代dC (bz)-amidite。
- 用乙腈溶解amidite, DNA合成不改变。在标准醋酐的capping试剂中可以用。
DNA快速脱保护基反应器是为有效制备生物样品而设计的,用于PCR引物、探针和组分生产,DNA测序、DNA和RNA合成、随机启动、载体设计、DNA指纹和人工基因合成。是DNA/RNA/寡核苷酸脱保护基快捷稳定的解决方案。反应可直接在96位样品架上进行,如“深井”板。6-10个样品架可用于10升压力反应器。因此,操作工作量大大缩短。样品被填充不同的板,例如带有过滤底座、特殊盖等,通过设计的电动升降系统,在反应中和反应后自动移出压力容器进行干燥。在开启和关闭过程中,会抽走腐蚀性反应气体,确保实验室人员的*安全。与样品的反应发生在气相的压力和微波效应下。高气相浓度会在几分钟内引起*均匀的反应。在系统中,所有操作参数均一直根据程序条件进行控制,并以图形方式记录和存储以进行质量控制。在整个过程中,液体试剂以及气相中的压力和温度是被控制的。这确保了样品的完整、可重复和均匀反应,以便随后分离出选择性DNA序列。*的10升反应器容量为*的样品吞吐量提供了新的可能性。
DNA快速脱保护基反应器应用:
食品工业
研究机构
大学
分子生物学
遗传学
合成生物学
医学
寡核苷酸脱保护基微波高压反应器特点:
反应器容量:10升容量
样品数量:6至10个,每个样品有96位。
温度范围:*200°C
功率输出:1200瓦
符合CE标志
保修12个月
电源:220 V至240 V/50/60 Hz
*功耗:2500瓦
显示屏:彩色触摸屏
尺寸:W x D x H 52 x 73 x 123厘米(无终端)
重量:180公斤