DNA化学合成固有的错误率较高，片段越长越是如此，挑选序列正确的克隆所花费的时间和金钱比DNA合成要多去了。挑克隆着实花费了无数学生们的不少好时光。所以，大家的选择标准也从价格渐渐回归到质量。各厂家之间，从过去拼价格，拼速度，到如今，拼的是纯化质量了。

说起DNA合成，几位前辈师兄师姐们犹会提起上世纪90年代世行dai款买仪器，好些单位甚至医院都赶时髦买了DNA合成仪，买回来才发现自己那点合成需求和费用，委实买得起用不起，那昂贵的设备成了摆设。彼时国外DNA合成虽然质量好纯度高，可寄回来海关不好过，时间上实在伤不起，幸亏国内迅速崛起的几家DNA定制合成供应商，以到货速度快和价格优势渐渐占据了低端市场，对于实验室来说，DNA定制合成于是变成了发传真+等收货那么简单的事。

也没那么简单。DNA化学合成固有的错误率较高，片段越长越是如此，挑选序列正确的克隆所花费的时间和金钱比DNA合成要多去了。挑克隆着实花费了无数学生们的不少好时光。所以，大家的选择标准也从价格渐渐回归到质量。各厂家之间，从过去拼价格，拼速度，到如今，拼的是纯化质量了。不纯化，PAGE纯化，HPLC纯化，到反相纯化，有多大区别？纯化过的DNA oligo是不就去除了全部错误序列呢？我们得先从DNA合成的错误成因谈起：

1. 内部缺失（n-1，n-2 etc）产物。这是化学合成DNA zui普遍与zui主要的限制因素，且不能通过纯化DNA oligo来解决这个问题。化学合成DNA不及活细胞内DNA复制具有高保真性，在活细胞内，存在大量的校正与修复系统，将碱基突变率降低至1/(1×106)以下。PCR反应也具有较高的保真度，例如：错误率在1/1000——1/10000，并且还可通过DNA 聚合酶的性能提高保真度。但是化学合成DNA不同，每单个合成循环的错误率约为1/100，随碱基数目增加而增加。其原因包括：

(1)DNA oligo的化学合成是碱基与碱基之间通过化学反应偶联而成，而化学反应的偶联效率一般在99%左右，也就是说，在每次进行偶联反应时，都会有1%的DNA片段附加不上新的碱基，对这种截断的失败序列，为了防止其参与后续的偶联反应，采用CapA与CapB进行化学封闭，以阻断其延伸，但化学封闭反应的效率不可能达到100%。导致出现合成失败的DNA片段或截断序列残留在合成的DNA粗制品中。

(2)DNA oligo的不*脱保护。寡核苷酸的*脱保护包括从磷酸酯基团、碱基上的环外氨基和5′-OH部分上去掉保护基团。脱保护的化学反应效率不可能达到100%，未脱保护的碱基无法参加偶联反应而导致DNA oligo内部缺失碱基。

(3)不断延长的DNA链与不断累积的副产物会干扰DNA oligo的化学合成。

对于以上三方面问题，至今为止还没有找到一个的解决方案。因为延长盖帽时间也不能保证封闭反应效率达到100%；而对于脱保护反应来说，增加脱保护试剂量及延长脱保护时间又会导致DNA oligo脱嘌呤。因此只能采取折衷方法将不*脱保护与脱嘌呤同时控制在低水平上。内部缺失碱基的截断序列绝不可能100%去除干净，对于几种纯化方法来说，OPC或HPLC不可能去除内部缺失碱基的截断序列，的方法是通过PAGE纯化降低截断序列数量。

2. 单核苷酸的插入是存在于目的DNA oligo产物中的另一种常见的序列错误。

当同一DNA oligo分子中存在G-偶联或单碱基插入(n+1)同时又存在单碱基缺失（n-1）时，此条DNA oligo的长度与目的DNA分子的长度相同，因此无法通过OPC 、HPLC或PAGE纯化将此“失败序列”去除。 DNA oligo化学合成存在的这些弊端曾被Hecker KH与Rill R报道过（Error analysis of chemically synthesized polynucleotides. Biotechniques，1998 Feb；24：256-260）。在这篇文章中，作者合成并PAGE纯化了长链DNA oligo，用它们进行PCR克隆，然后测序鉴定了10个克隆，发现存在7个单碱基缺失，一个连续的4个碱基缺失，一个G-C替换。除了这些碱基错误，其它学者还曾报道存在G-偶联、分支及其n+x产物。

为了解决上述碱基出错的问题，首先要优化化学合成方法来提高DNA oligo的纯度，并且对DNA oligo粗制品进行纯化，虽然无论哪种纯化方式都不能保证去除错误序列，但能改善产品的纯度，进而提高实验的成功率。Oligo的纯化方式常见的有脱盐、OPC、PAGE和HPLC。脱盐只能去除氨、盐等杂质，而不能有效去除合成过程中产生的短片段，因此一般只能用于普通的PCR反应和测序。HPLC和PAGE纯化得到的纯度很高，但只能进行手工操作，相当费时费力。OPC不仅能去除短片段，当DNA oligo的长度在40 bases以内，其纯度与HPLC或PAGE纯化的纯度相当，而且由于简便、快捷，能进行高通量（high-throughput）和自动化（automation）操作，因而受到很多DNA合成公司的青睐。

但OPC纯化也有一个缺点，就是在操作过程中需要一种弱酸脱掉DMT基团，而DNA Oligo在酸性条件下容易脱嘌呤（depurination）。对于脱嘌呤后的碱基，DNA聚合酶不能识别，可能导致PCR扩增后出现碱基缺失或错配。因此，有些公司不推荐OPC纯化用于克隆、突变、基因合成等实验。

一般来说，不同厂家的合成方法其实并没有什么大的本质的区别，只是有一些经验的积累和技巧。比如脱保护剂浓度的选择很重要，太低脱保护不*，太高又增加脱嘌呤的机率，还有如何优化程序，使盖帽更充分、更*等等…。纯化方式的选择，一般说来修饰标记要用HPLC纯化，长链要用PAGE 纯化，但这两种纯化方式都非常费时耗力。

DNA合成中氨解---脱保护基微波高压反应器是为有效制备生物样品而设计的，用于PCR引物、探针和组分生产，DNA测序、DNA和RNA合成、随机启动、载体设计、DNA指纹和人工基因合成。是DNA/RNA/寡核苷酸脱保护基快捷稳定的解决方案。反应可直接在96位样品架上进行，如“深井”板。6-10个样品架可用于10升压力反应器。因此，操作工作量大大缩短。样品被填充不同的板，例如带有过滤底座、特殊盖等，通过设计的电动升降系统，在反应中和反应后自动移出压力容器进行干燥。在开启和关闭过程中，会抽走腐蚀性反应气体，确保实验室人员的*安全。与样品的反应发生在气相的压力和微波效应下。高气相浓度会在几分钟内引起*均匀的反应。在系统中，所有操作参数均一直根据程序条件进行控制，并以图形方式记录和存储以进行质量控制。在整个过程中，液体试剂以及气相中的压力和温度是被控制的。这确保了样品的完整、可重复和均匀反应，以便随后分离出选择性DNA序列。*的10升反应器容量为*的样品吞吐量提供了新的可能性。

DDNA合成中氨解---脱保护基微波高压反应器应用：
食品工业
研究机构
大学
分子生物学
遗传学
合成生物学
医学

DNA合成中氨解---脱保护基微波高压反应器特点：
反应器容量：10升容量
样品数量：6至10个，每个样品有96位。
温度范围:*200°C
功率输出：1200瓦
符合CE规范
电源：220 V至240 V/50/60 Hz
*功耗：2500瓦
显示屏：彩色触摸屏
尺寸:W x D x H 52 x 73 x 123厘米（无终端）
重量：180公斤