人胰岛素(INS)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书

实验原理 ：

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) 。往预先包被有人胰岛素(INS) 捕获抗体的微孔中， 依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体，HRP 酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛素  (INS) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 (OD 值) ，计算样品浓度。

操作步骤 ：

1.  从室温平衡 10 分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  加样：分别将样品或不同浓度标准品按照 100 μ l 每孔加入相应孔中，空白孔加入 100μL 通用稀释液。盖 上封板膜后 37℃温育 1 小时。  (建议：将待测样本用通用稀释液稀释 1 倍后再加入酶标板内测试。从 而减少基质效应对测试结果的误差影响，最后计算样本浓度时需乘以对应的稀释倍数。所有的待测样本和 标准品在检测中建议设立复孔) 。

3.  加生物素化抗体：取出酶标板，弃去液体，不用洗涤。每孔直接加入生物素化抗体工作液 100 μL，盖上封 板膜后 37℃温育 1 小时。

4.  洗板：弃去液体，每孔加入 300 μL 1x 洗涤液，静置 1 分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板

3 次 (也可用洗板机洗板) 。

5.  加酶结合物工作液：每孔加入酶结合物工作液 100 μL，盖上封板膜后 37℃温育 30 分钟。

6.  洗板：弃去液体按步骤 4 洗涤方法，洗板 5 次。

7.  加底物：每孔加入底物(TMB)90 μL，盖上封板膜，37℃避光温育 15 分钟。

8.  加终止液：取出酶标板，每孔直接加入终止液 50 μL，立即在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断：

1.  计算标准品和样本复孔的平均 OD 值并减去空白孔的OD 值作为校正值。以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标， 在双对数坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。

2.  若样品OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

典型数据和参考曲线：

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

试剂盒性能 ：

1.  重复性：板内变异系数小于 10%，板间变异系数小于 10%。

2.  回收率：在选取的健康人血清、血浆和组织匀浆中加入 3 个不同浓度水平的人 INS，计算回收率

3.  线性稀释：分别在选取的 4 份健康人血清、血浆和组织匀浆中加入高浓度人 INS，在标准曲线动力学范围

内进行稀释，评估线性。评估线性。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断          6

注意事项：

1.  严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃ 。使用

后立即冷藏保存试剂。

2.  洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3.  消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD 值。

4.  底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.  避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.  在储存和温育时避免强光直接照射。

7.  平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.  任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂

的生物活性。

9.  不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。