维生素 A（retinol）、维生素 D（vitamin D2 和 vitamin D3）、维生素E（tocopherol）是机体维持正常代谢和机能的所必需的脂溶性维生素。其中维生素 E 有 8 种异构体形式，即4 种生育酚（α、β、γ、δ-tocopherols）和 4 种三烯生育酚（α、β、γ、δ-tocotrienols），均具有重要的生物活性，被认为是一类主要的抗氧化剂。通常α-生育酚被报道是活性高的一种维生素E 形式，因此很多文献报道的分析方法仅测定了α-生育酚的含量。近研究表明，其他几种异构体形式也在人体中具有重要的作用，并且γ-生育酚具有抗癌作用。维生素E 异构体结构的复杂性和活性的差异，决定了建立一种准确可靠的分析方法，来分离和测定食品基质中各个异构体含量，具有重要意义。如何进行食品中维生素A、D、E的测定呢？

新版国标GB5009.82-2016对维生素E的四种异构体的分析提出了要求。而常规C18色谱柱很难将其实现基线分离。另外维生素 D 也是婴幼儿配方食品中一种重要的营养素，在用常规反相C18分析D2 和D3 异构体的时候经常遇到分离度差的问题。

本文建立了同时测定食品中D和E含量的液相色谱法，可实现对维生素E的四种异构体和D2和D3两种异构体的分析及准确定量。

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样品前处理

取维生素 D2、D3 和E 标准品适量，精密称定，至25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度分别为 1.0 mg/mL 维生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 维生素 E 储备溶液。

分别精密量取维生素 D3 和 E 的标准品溶液适量，至 10 mL 棕色量瓶中，配制成混合溶液，再分别精密加入等量的浓度为 10 μg/mL 的维生素 D2 的内标溶液，甲醇稀释至刻度，分别得到浓度为：ɑ-VE：2.4μg/ml，ß-VE：2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.

仪器方法

四种维生素E异构体分析的色谱条件：

方法一

色谱柱：Acclaim C30

4.6×250 mm,5 μm(货号：075718)

流动相：甲醇-水

流速：0.8mL/min

检测器：紫外，296nm

柱温：20℃

进样量：10μL

仪器：Ultimate 3000

图1 四种维生素E的实验图谱:Acclaim C30

方法二

色谱柱：Accucore PFP

3.0×150 mm,2.6 μm(货号：17426-153030)

或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(货号：25405-254630)

流动相：甲醇-水

流速：0.6mL/min （Accucore PFP）, 1ml/min（GOLD PFP）

检测器：紫外，296nm

柱温：20℃

进样量：10μL

仪器：Ultimate 3000

图2 四种维生素E的实验图谱：Accucore PFP

图3 四种维生素E的实验谱图：GOLD PFP

两种维生素D异构体分析的色谱条件：

色谱柱：Hypersil Green PAH

4.6×150 mm,3 μm(货号：31103-154630)

流动相：乙腈：甲醇=60:40

流速：1mL/min

检测器：紫外，264nm

柱温：35℃

进样量：10μL

仪器：Ultimate 3000

图4  两种维生素D异构体的实验图谱

结论

采用赛默飞公司Acclaim C30，Accucore PFP，GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色谱柱可按照国标GB 5009.82-2016条件对维生素ADE进行分析，并对各化合物有较好的保留和分离。