今天，将为您带来梯度方法开发攻略②：梯度条件的影响因素，共同探讨在梯度条件下需要注意哪些因素。

1. 不同色谱柱的分离选择性

2. 梯度斜率

3. 初始有机相比例

4. 梯度拐点设置

5. 流动相或柱温优化

 不同色谱柱的分离选择性

不同色谱柱的疏水性、表面极性存在差异，因此化合物的出峰时间也会受到影响，我们可以根据化合物的特性选择合适的色谱柱。

 梯度斜率

梯度斜率  N =Δ B% / tGra （% / min）

梯度斜率越大，洗脱速度越快，但分离度同时下降。

 初始有机相比例

初始比例  Binitial %，通常对于早出峰的化合物保留分离影响大。

 梯度拐点设置

合理设置梯度拐点，可以有效地缩短分析时间。

  流动相或柱温优化

温度从35℃升高到45℃，增强了化合物的分离度。

调整流动相比例，可以有效缩短分离时间。

通过更换色谱柱柱长、粒径、流速、来获得快速分析结果。

梯度分析中需要注意的几个问题

1）梯度条件需要进行充分洗脱；

2）梯度进行完毕需要重新平衡回初始状态，才能进行下一个梯度序列的分析；

3）梯度条件会造成基线漂移，需要进空白样确定梯度基线变化；

4）注意观察压力变化情况；

5）当流动相中含有缓冲盐时，在梯度有机相高点不得盐析。