原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。

原代细胞如何进行培养？

常用的原代细胞培养有组织块培养和分散细胞培养。

分散细胞培养大致步骤为：将动物组织从机体中取出离散成单个细胞（常用胰蛋白酶），置合适的培养基中培养，使细胞 得以生存、生长和繁殖（注意整个过程无菌）。

组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。

原代细胞培养中的常见错误及正确操作方法？

错误＃1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

纠正＃1：原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

错误＃2：解冻小瓶后直接离心原代细胞

纠正＃2：我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

错误＃3：允许原代细胞变得过于融合

纠正＃3：当生长至100％汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100％纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95％融合时，对原代细胞进行传代培养。

错误＃4：传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正＃4：当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后*中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。推荐专门为原代细胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制剂。

错误＃5：原代细胞可以很容易地重新冻存

纠正＃5：通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

错误＃6：原代细胞可以无限的增殖

纠正＃6：与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。