C4、C8、C18预装反相色谱柱必须在至少含有5%有机溶剂的移动相中工作。在100%水溶液中，预装色谱柱内的填料很可能会发生脱水，也就意味着该移动相将在表面张力的作用下被填料微球的内孔系统所排斥。在这种情况下，待分析样品或多或少是路经死体积被洗脱出来。并且，一旦移动相在色谱柱内静止时问题就会暴露出来。如果填料脱水现象已经发生，在色谱柱上连续泵入40分钟左右，有机溶剂含量至少达到50%的移动相，就可以使色谱柱状态恢复到原来水平。