ELISA试剂盒实验中封闭更关键

封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体

非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不

充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。

如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也

是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多

个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特

异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。

zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特

异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添

加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一

个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。

蛋白封闭液则有所不同，是*的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗

原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组

分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与

Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。