原代细胞实验需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

步骤如下：以24孔培养板为例

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml*培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，zui后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、原代细胞鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。
HPLC法含量测定    100mg    100784-200701    美他多辛
HPLC法有关物质检查    50mg    100785-200701    D-焦谷氨酸
检查用    50mg    100786-200501    托拉塞米杂质
含量测定用    50mg    100787-200501    奈达铂
检查用    100mg    100788-200501    3-吲哚甲酸
检查用    100mg    100788-200501    盐酸托烷司琼杂质
HPLC法含量测定    100mg    100789-200501    塞曲司特
HPLC法含量测定    100mg    100790-200501    氢溴酸西酞普兰
HPLC法含量测定    100mg    100791-200501    利拉萘酯
原代细胞