要使elisa试剂盒供应商测定得到的成果，不论是定性的仍是定量的，必须严厉依照规则的办法制备试剂和施行测定。首要试剂的制备关键已如前述，其他一般性试剂，如包被缓冲液、洗刷液、标本稀释液、结合物稀释液、底物工作液和酶反响停止液等，时不行掉以轻心。缓冲液可于冰箱中短期保存，运用前应调查是否蜕变。蒸馏水的质量在ELISA中也至关重要，运用新鲜重蒸馏的。不合格的蒸馏水可使空白值升高。
测定的施行中，应力求各个过程操作的标准化，下面以板式ELISA为例，介绍有关留意事项。
（一）ELISA试验加样
在ELISA中除了包被外，一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的性，例如规则为加样一滴。此刻应该运用相同口径的滴管，坚持的加样姿态，使每滴液体的体积根本相同。在定量测定中则加样量应力求。标本和结合物的稀释液应按规则。加样时应将液体加在孔底，防止加在孔壁上部，并留意不行出现气泡。
（二）ELISA试验保温
在ELISA中一般有二次抗原抗体反响，即加标本后和加结合物后，此刻反响的温度和时刻应按规则的要求，保温容器是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不该叠在一起。为防止蒸腾，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热简单。如用保温箱，空湿盒应预先放在其间，以平衡温度，这在室温较低时更为重要。参加底物后，反响的时刻和温度一般不做严厉要求。如室温高于20℃，ELISA板可避光放在试验台上，以便不时调查，待对看管显色适其时，即可停止酶反响。