影响ELISA试剂盒 测定结果的因素主要包括以下几点:
( 1) 抗原包被的质量。将抗原固定于聚苯乙烯微量反应板中称之为包被, 其效果好坏是影响抗原?? 抗体反应的重要因素;
( 2) 非特异性反应干扰的排除。除了设置稀释液空白、阳性和阴性参比血清等对照外, 可采用包埋、封闭等预处理, 如在包被液中加入牛血清白蛋白、明胶或吐温- 20 等, 以减少非特异性反应的发生。高选择性的单克隆抗体代替多克隆抗体也是提高ELISA 特异性的另一有效途径[ 3] 。此外, 选择表面积较大的固相载体, 也有利于提高ELISA 的敏感性;(3) 酶和交联剂的选择。用于ELISA 标记的酶, 主要有辣根过氧化氢酶(HRP) 、碱性磷酸酯酶(AKP) 、葡萄糖氧化酶( GO) 和半乳糖苷酶等, 而以HRP 用得较多。酶和抗体交联可用免疫法( 酶-抗酶抗体) 或化学法, 常用化学法。一般来说, HRP与抗体的交联现多采用改良Wilson?? s 法( 高碘酸钠
氧化法) , AKP 与抗体交联通常有戊二醛法和偶氮法[ 3] ;( 4) 酶底物。它本身要求无色, 反应后能稳定呈色。一般HRP 常采用邻苯二胺( 产物桔黄色, 可稳定呈色数小时) 或邻联甲苯胺作酶底物; AKP 常用对硝基苯磷酸盐作酶底物。
2?? 酶联免疫吸附在食品微生物检测中的应用
2. 1 ?? 细菌的检测
检测方法( 薄层层析法TLC、放射免疫分析法RIA、液相色谱法HPLC)进行了对比研究。结果表明直接竞争ELISA 及间接竞争LISA 具有灵敏、特异、简便、快速、安全、价廉等特点, 适合在我国基层推广应用。路戈等[ 14] ( 1996 年) 利用抗AFB1 的单克隆抗体建立了检测食品( 玉米、花生、小麦、大米、植物油) 中AFB1 的ELISA 间接竞争法。该方法zui低检出浓度为0. 0lng/ g, 敏感范围为0. 2~ 50ng/ g, 平均回收率为83. 0~ 110. 3%, 精密度为2. 0~ 24. 3%。用该法测定了分布于淮河以北地区的1455 份样品, 并对25 份植物油样品用TIC 和ELISA 两种方法进行了对比测定。结果表明, 在方法灵敏度下( 5ng/ g ) TLC 均无AFB1 检出, 而ELISA 法AFB1 检出率为96%, ELISA法的检测灵敏度远高于TLC 法。黄薇等[ 15]( 2002年) 运用ELISA 并使用试剂盒对292 份样品进行了黄曲霉素B1 的检验, 并与薄层法进行了比较。结果表明: 回收率为72% ~ 95% , 变异系数为2. 76% , 与薄层法相比, 该法快速、简便、灵敏、安全。用酶联免疫吸附法检测食品中赭曲霉毒素A的方法, 也有综述性介绍[ 16] 。