微生物污染是一直是细胞培养的一个主要问题，大到诸如细胞间、层流室这种实验室的设计布局，小到每一次试剂外包装的消毒，都是在为了细胞免受外源微生物的侵害。应各位老师们的要求，今天这篇文章主要讲解细胞房的除菌方案，顺便讨论一下常见的无菌操作漏洞。

当您和同门的细胞频繁出现污染，更换试剂之后仍然不能改善，细胞丢弃一波又一波，建议为细胞间来场消毒吧。无论是紫外线照射（物理方法）还是甲醛加高锰酸钾熏蒸，都是为了尽可能的杀灭空气中的微生物。

图1 细胞室

一、紫外线照射法

紫外线按照波长划分为四个波段：长波UVA、中波UVB、短波UVC、真空波UVD。波长越长，穿透能力越强，其中UVC（波长200～280nm）被用来做紫外线杀菌灯，可作用于DNA使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体改变了DNA的分子结构，干扰DNA的复制与转录导致细菌死亡或变异，缺点也是显而易见的，UVC穿透力差，无法穿透大部分的透明玻璃及塑料，同时短时间照射即可灼伤皮肤，长期或高强度照射还会造成皮肤癌。

图2

这里提示在购买紫外线消毒灯的时候登录全国消毒产品网上备案信息服务平台查询备案，可以看到生产许可证，检测报告等信息。

具体可参照：约13m²的房间30w紫外灯（距地面约2.5m）照射1h，照射前抹净灯管灰尘，建议一周一次。照射时人员禁止入内。

图3 消毒产品网上备案信息

二、甲醛加高锰酸钾熏蒸法

甲醛无易燃易爆危险易于获得故在消毒与灭菌方面使用较为普遍。醛类主要通过凝固蛋白质还原氨基酸使蛋白质分子烷基化而杀灭细菌和其他微生物，KMnO4是一个强氧化剂，它会使得菌体酶蛋白失去活性，代谢机能障碍而死亡。这种方法的缺点是醛蒸气刺激性较大对人体有害，是致癌物质，并且对呼吸道的刺激较大。具体可参照：每立方米加甲醛80ml：高锰酸钾40g（2:1的比例），一定要先将高锰酸钾倒入敞口容器，再加入40%的甲醛！密闭熏蒸24h左右，充分通风（至少24h）在确保细胞房内没有甲醛的刺激性气味后实验人员才能进入。

安全提示：动作要迅速，两者反应较强烈，做好防护，注意不要溅到！甲醛遇到KMnO4会产生强烈的氧化反应，溅出来是很危险的，所以一定要使用敞口容器！！！

两者相比，甲醛熏蒸法效果更好，特别对于一些较难消除的真菌，但是由于甲醛的致癌性，不建议频繁使用，可以结合紫外线照射法交替进行。

三、细胞房除菌剂

在进行紫外线照射或者甲醛熏蒸之前，需要对细胞间各个角落进行擦拭，爱必信细胞房清除剂，用于细菌、真菌清除，具有很强的抑菌功能，可用于细胞房的污染控制，通过清除细胞房内细菌、真菌及其孢子，可有效防止细胞的污染。

图4 细胞房除菌剂

使用方法：

1）直接对细胞房的死角、墙面、空间进行喷洒，也可倒出少许，将脱脂棉球浸泡后擦拭使用。 建议一周处理一次，配合紫外线使用效果更佳。
2）建议每立方米(m^3)使用量为5~8mL，如10m^2、高3m的房间推荐用量为150mL。遇污染爆发时期，如梅雨季节等，可适当增加用量。若室内墙壁上有霉菌生长，可喷洒于墙壁表面，或者用浸泡后的棉球擦拭。

温馨提示：

1）操作时，穿戴适当的防护服和手套操作；
2）处理后，人尽量远离细胞培养室，待密封20~30 min 通风 10min 后再使用；
3）避免直接接触皮肤、眼睛，一旦接触，应立即用大量的清水冲洗，不要延误。

图5 实验室清洁剂

[1] 刘水平,罗志勇.细胞培养室空气消毒效果的检测[J].生物医学工程研究,2006(01):53-54.

今天的讲解就到这里啦，感兴趣的老师们可以公众号“爱必信生物”后台留言哦。

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