答：我们查阅大量文献，构建原发肿瘤和转移癌的类器官都是用的适合原发肿瘤的类器官培养基，比如肠癌的原发灶和转移灶，乳腺癌的原发灶与转移灶，所以用原发部位的癌类器官培养基比较好。

答：转移性的类器官形态和原发性的比较像。

答：类器官长的比较大的话，50-100um之间加药就可以了；长的比较小的类器官50um左右就行了。一般传代后2-3天，就可以加药，加药再培养3-4天可以检测。

答：直接放在冰上30min，凝固后直接放在70%乙醇里，4℃过夜。

答：可以用组织冻存液梯度冻存放液氮，等条件成熟再复苏培养即可。

答：和恶性积液的方法类似，离心回收细胞，包埋基质胶，加类器官培养基。

答：不管是哪种污染，细菌，霉菌，类器官都必须舍弃，同时往培养皿中倒入84等消杀试剂，防止传播。

答：流式分选是可以的，也直接挑取你要的类器官扩增即可。一般类器官长到100um肉眼是可见的，直接超净台上，使用200μL移液枪头直接挑下来类器官，然后进行传代操作。

答：所以一般铺板后，不会马上做药筛，会养1~2轮换液周期（3~6天）从新评估各个孔的情况，选取合适的孔做实验。

答：有些24h，有些48h，比如化疗药，每种药的时间点是不一样的，要根据自己要做的药物，摸一下时间梯度。

答：排除掉培养操作技能的影响，肝实质癌类器官，对于未治疗的肝癌组织培养成功率相比治疗过的成功率高，可能经过治疗后的肝癌细胞活性降低，同时也和营养体系的优化等有一定关系。

今天讲解就到这了，大家如有实验问题，欢迎入群交流哦！

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