冰冻切片：

是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断，也是组织化学，特别是酶组织化学很常用的切片技术。

图1 冷冻切片机

冰冻切片与石蜡切片对比：

OCT包埋剂的应用：

与石蜡组织相比，冷冻切片的简便快捷使其在临床组织学诊断中应用广泛，特别适用于脂肪组织、神经组织、髓鞘，以及肌肉的活检染色。

OCT包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，其用途是在冰冻切片时支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。OCT混合物为水溶性，故在漂片时可溶于水，在后续的染色中不会增加背景染色。爱必信的OCT包埋剂六折，质量媲美樱花，包埋效果被许多客户肯定！

图2 abs9756-110mL OCT包埋剂

冰冻切片样本制备：

冰冻切片的样本制备较为简单。

方式一：尽量选用新鲜组织，用生理盐水清洗掉表面血水，将组织修剪到一定大小，用吸水纸吸干表面水分（防止水分在速冻过程中形成冰晶），直接进行后续包埋。

方式二：选取新鲜组织，修整到一定大小，至于多聚甲醛中低温固定18-24h，再经过30%的蔗糖沉降脱水（或者梯度脱水，15%蔗糖中脱水至沉底，再转到30%蔗糖中沉底），再经过OCT的包埋。

包埋：提前准备泡沫箱，倒入一定量的液氮，在包埋磨具中加入少量OCT覆盖磨具底部（避免产生气泡，若产生气泡可用注射器或者枪头吸弃），将组织至于OCT包埋剂中，调整组织位置，加入OCT包埋剂全面覆盖组织（避免产生气泡），用镊子夹住磨具，至于液氮上方，大概10-20s后，组织就会迅速的冰结成块，若不能及时切片，用锡纸包裹，做好标记，至于-80℃冰箱内保存。

图3 冰冻切片一次性包埋磨具

许多老师纠结于方案一和方案二的选择，这里给到的建议是，如果是手术中的快速诊断，简单的HE染色，可以用方案一，结果快，但是在追求速度的同时，极大的降低了灵敏度，科研实验或者做多重荧光免疫组化，推荐使用方案二，为的是保证染色时能精确定位，提高特异度和灵敏度。

切片制作：

1、切片前调整冷冻切片机温度在-25℃~-18℃；

2、在标本拖上涂适量包埋剂，将冷冻包埋好的样本取出，至于标本拖上冷冻固定；

3、将样本拖至于冷冻切片机的机头上，调整位置；

4、调整切片厚度进行修片（修片时厚度可以大一些），修整标本至组织块暴露。用毛笔将操作区清扫干净；

5、重新调整切片厚度，进行正式切片，切下的组织片在防卷板下方平铺，可用毛笔辅助组织片平整，用防脱载玻片平稳吸附切片。

注意事项：

1、操作时，玻璃机盖不可打开过大，以免温度变化；

2、载玻片吸附切片之前应置于室温，否则难以吸附；

3、样本拖涂的包埋剂要尽量平整，不可一边高一边低，会影响切面位置。

图4 爱必信组化试剂盒

冰冻切片常见问题及对策：

1、温度对切片的影响

组织块过冷切片时易碎裂或成粉末状，温度不足，组织回软也不能保证切片的完整。

2、切片皱缩或卷缩

可能的原因有：刀片不够锋利、防卷板有异物、防卷板与刀片位置不协调他、包埋剂包埋不全。

3、切片脱落或吸附性差

可能的原因有：实验前防脱载玻片至于冷冻切片机内，样本中有坏死区域，切片过厚、载破片有异物。

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