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时间：2024-04-18 阅读：378
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文献信息
题目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation
杂志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.
作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al
图 文献引用产品信息
研究背景
结直肠癌(CRC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一，主要原因与CRC干细胞(CCSCs)引起的术后癌症复发、转移或癌细胞耐药有关，CCSCs缺乏一致和可靠的标记物限制了它们在临床实践中的使用。为了启动促炎反应，脂多糖(LPS)和CD14（单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的一种特殊表面标志物）通过Toll样受体4(TLR4)信号通路相互作用，此外，脂多糖通过TLR4信号通路促进结直肠癌的发展和转移，CD14与肿瘤的复发、生长、转移和治疗耐药有关，这与CSC的特征（如复发、生长、转移和耐药）是一致的，这表明CD14可能与CCSCs相关。
研究方法
本研究采用免疫荧光双标记法检测CD133和CD14，定量评估结直肠癌组织和癌旁组织石蜡包埋切片CCSCs中CD14的表达。随后，从结直肠癌组织中提取CD14+细胞，通过分析增殖、肿瘤亲和性和治疗耐药性来检测其干性特征，以证实表型鉴定。此外，迁移的体外检测能够检测CD14的功能。
研究结果
1、癌旁组织相比，所有结直肠癌组织中CD14和CD133共表达的阳性率均显著升高。
图 CD14在CD133标记的结直肠csc中表达
2、EdU和CCK-8检测结果显示结肠癌CD14+细胞表现出更强的增殖能力。
图 结肠癌CD14+细胞表现出增强的增殖能力
（CCK-8购自爱必信abs50003 CCK-8试剂盒）
3、细胞克隆实验表明，与CD14-细胞相比，CD14+细胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠异种移植实验表明植入45天后，CD14+细胞组的肿瘤明显大于CD14-细胞组。
图 CD14+细胞在结肠癌中具有致瘤性
4、耐药性分析。CD14+组和CD14-组细胞的IC50分别为2.554和17.02mg/L，表明与阴性组相比，阳性组的耐药性增加。
图 CCK-8测定5-FU对CD14+和CD14-细胞48h的IC50效应曲线
5、Transwell实验结果显示，与对照组相比，内毒素组表现出更强的迁移能力，而内毒素+中和抗体组的迁移能力比对照组更强（图A）。创面愈合实验表明，内毒素组的细胞迁移能力明显高于内毒素+中和抗体组（图B）。RT-qPCR结果显示MyD88基因表达水平以内毒素组最高（图C），Western blotting显示TLR4和MyD88蛋白的表达在内毒素+中和抗体组和内毒素组均显著高于对照组，其中内毒素组的增加更明显（图D）。
图 内毒素影响细胞迁移
（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝胶试剂盒(10%)abs9367、ECL化学发光检测试剂盒abs920、 TLR4抗体abs132000、MyD88抗体abs135682、LPSabs47014848, 细胞快速RNA提取试剂盒 abs60027）
常规裂解液对比
品名 | RIPA裂解液（弱） | RIPA裂解液（中） | RIPA裂解液（强） |
货号-规格 | abs9230-100mL | abs9228-100mL | abs9229-100mL |
成分表 | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) |
150mM NaCl | 150mM NaCl | 150mM NaCl | |
1%NP-40 | 1%NP-40 | 1%Triton X-100 | |
0.25% 脱氧胆酸钠 | 0.5% 脱氧胆酸钠 | 1% 脱氧胆酸钠 | |
0.1% SDS | 0.1% SDS | ||
以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 | 以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 | 以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 | |
特点 | 不含高浓度去垢剂 | 有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度 | 有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度 |
裂解强度 | 温和 | 中 | 强 |
膜蛋白 | 一般 | 较好 | 很好 |
胞浆蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 |
核蛋白 | 较好 | 较好 | 很好 |
应用推荐 | WB，IP，Co-IP | WB，IP | WB，IP，Co-IP |
本期好物推荐
类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
样本处理 | abs9346 | 细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒 | 50T |
abs9116 | 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
abs9162 | 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) | 1mL | |
abs9161 | 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100×DMSO储液) | 1mL | |
蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量试剂盒 | 500T |
胶 | 配胶试剂盒、Glass gel预制胶、Plastic gel预制胶、abs93系列预制胶 | ||
上样与电泳 | abs953 | 上样缓冲液(2×) | 10mL |
abs9829 | 上样缓冲液(5×) | 10mL | |
abs951 | 电泳液(10×) | 100mL | |
abs923 | 预染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
转膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 20张 |
abs960 | NC膜(0.45μm) | 20张 | |
abs950 | 电转液(10×) | 100mL | |
封闭 | abs9175 | 脱脂奶粉 | 500g |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗体稀释与去除 | abs954 | WB专用一抗二抗稀释液 | 100mL |
abs967 | Western一抗二抗去除液(强碱性) | 500mL | |
显色与检测 | abs920 | ECL化学发光检测试剂盒 | 25mL×2 |
Absin产品线：
爆款产品：试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测)；细胞培养(类器官试剂盒+基质胶，胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒；分子(mRNA合成服务+提取试剂盒)；化合物大包装；辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
特色产品：鸡胚提取物CEE、B27、N2、霍乱毒素B亚单位CTB、牛脑垂体提取物BPE、百日咳毒素PTX、重组人胰岛素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...