小鼠谷草转(GPT)酶联免疫分析实验原理
时间:2019-01-25 阅读:984
小鼠谷草转(GPT)酶联免疫分析实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷草转(GPT)。用纯化的小鼠谷草转(GPT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入谷草转(GPT),再与 HRP 标记的谷草转(GPT)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转(GPT)呈正相关。用酶标仪在 450nm波化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷草转长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠谷草转(GPT)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后37℃温育30分钟。30倍稀释后备用
配液:将 30倍浓
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静重复 5次,拍干。30秒后弃去
加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
操作程序总:
计算以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
小鼠谷草转(GPT)酶联免疫分析注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有析出,稀释时可在浴中加温助溶,洗涤时不影响。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
6.底物请避光保存
小鼠谷草转(GPT)酶联免疫保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月