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反应五要素:
假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒品牌参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒品牌 | 50T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒品牌15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
4-羟甲-4'-甲-2,2'-联吡分子式:200.24分子量: C12H12N2O英文名称:4-, -4'-, -2,2'-CAS号:81998-04-1
瑞氏色素/瑞氏染色液英文名称:Red pigment / Wright's stainCAS号:68988-92-1分子式:分子量: C36H27N3O5Br4
5-溴噻唑分子式:164.02分子量: C3H2BrNS英文名称:5- thiazole bromideCAS号:3034-55-7
8-氯喹啉分子式:163.61分子量: C9H6ClN英文名称:8- chlorideCAS号:611-33-6
钾分子式:786.4分子量: HgI4K2英文名称:Potassium mercuric iodideCAS号:7783-33-7
大豆皂苷AA英文名称:Soybean saponin AACAS号:117230-33-8分子式:1365.46分子量:C64 H100 O31
氘代溴分子式:162.04分子量: C6BrD5英文名称:Deuterated bromobenzeneCAS号:4165-57-5
2-溴-3-三氟甲吡分子式:226分子量: C6H3BrF3N英文名称:2- three -3-CAS号:175205-82-0
直接冻黄G英文名称:Direct frozen yellow GCAS号:2870-32-8分子式:680.66分子量: C30H26N4Na2O8S
1-戊咪唑分子式:138.21分子量: C8H14N2英文名称:1- methyl imidazoleCAS号:
并噻吩砜分子式:166.2分子量: C8H6O2S英文名称:Benzene and thiopheneCAS号:825-44-5
假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒品牌phospho-Tau protein(Ser262) 磷酸化微管相关蛋白抗体 0.1ml
PDX1 胰岛素促进因子抗体(胰十二指肠同源异型盒蛋白) 0.1ml
RAP2B 原癌基因相关蛋白RAP2B抗体 0.2ml
A Raf/ARAF A-Raf抗体 0.1ml
GABRA5/GABA A Receptor alpha 5 γ1氨基受体α5/GABRα5抗体 0.1ml
C11ORF16 11号染色体开放阅读框16抗体 0.2ml
FSTL1/FRP 卵泡相关蛋白1 0.1ml
RNF158 心脏蛋酸酶1结合蛋白/环指蛋白158抗体 0.2ml
phospho-STAT6(Thr645) 磷酸化信号转导和转录激活因子6抗体 0.1ml
SEK1/MKK4 丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体 0.2ml
Integrin alpha L/CD11a 整合素αL抗体 0.1ml
HA tag(12CA5) HA tag标签单克隆抗体 0.1ml