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反应五要素:
猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒图片 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒图片15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
4-环己啉分子式:分子量:英文名称:4- cyclohexyl morpholineCAS号:
氧嗪酸钾分子式:195.17分子量: C4H2KN3O4英文名称:Potassium oxygenCAS号:2207-75-2
2-羟-4-甲吡分子式:109.13分子量: C6H7NO英文名称:2- hydroxy -4- methyl pyridineCAS号:13466-41-6
叠氮磷酸二酯(DPPA)分子式:275.2分子量: C12H10N3O3P; (C6H5英文名称:Two phenyl phosphate (DPPA)CAS号:26386-88-9
1-吡唑分子式:144.17分子量: C9H8N2英文名称:1- phenylCAS号:1126-00-7
偶氮二甲酰二分子式:252.31分子量: C12H20N4O2英文名称:Two azo two benzoyl piperidineCAS号:10465-81-3
木香烃内酯英文名称:CostunolideCAS号:553-21-9分子式:232.32分子量:C15H20O2
泰妥拉唑分子式:368.39分子量: C16H17N4NaO3S英文名称:Tai, ThaiCAS号:113712-98-4
萘英文名称:NaphthaleneCAS号:91-20-3分子式:128.17分子量: C10H8
罗卡因英文名称:RopivacaineCAS号:84057-95-4分子式:274.4分子量: C17H26N2O
嘧肟草英文名称:Ether of theCAS号:168088-61-7分子式:609.59分子量: C32H27N5O8
猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒图片IRF7 干扰素调节因子7抗体 0.1ml
E.coli O6 大肠杆菌埃希杆菌O6抗体(肠致病性大肠杆菌O6) 0.2ml
ADCK3/CABC1 伴侣蛋白bc1同源复合体抗体 0.2ml
CD36/PAS-4 CD36抗体 0.1ml
RIP1 受体相互作用蛋白激酶1抗体 0.2ml
CK42 细胞角蛋白42 0.1ml
LEU5/RFP2 白血病相关蛋白5抗体 0.2ml
MTLR 胃动素受体抗体 0.1ml
IL-4 (human) 白介素4抗体(人) 0.1ml
Phospho-FoxO3a (Ser253) 磷酸化叉头蛋白3A抗体 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE PE标记的兔抗水貂IgG 0.1ml
MKKS/BBS6 巴德-毕德氏综合征蛋白BBS6抗体 0.2ml