PAGE凝胶快速银染试剂盒说明书

货号:AA0117

规格: 1L

保存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月。

注：1L规格指可配制的硝酸银染色液的体积，实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。

产品说明:

蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高，该产品整个过程操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的蛋白条带。

AA0117 PAGE凝胶银染试剂盒操作步骤:

一、染色液配制(无水乙醇自备)

需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。

1、固定液：取40ml无水乙醇，10ml染色液A加去离子水至100ml，混匀；

2、敏化液： 取30ml无水乙醇，10ml染色液C加去离子水至100ml，混匀；

3、硝酸银染液：称取0.12g硝酸银，用50ml去离子水溶解，加入10ul染色液B混匀，加去离子水至100ml现用现配。

4、显色液：10ml显色液D和30ul染色液B加入去离子水至100ml，混匀，现用现配。

5、终止液：取5ml染色液A加去离子水稀释至100ml，现用现配。

二、染色：

1、PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用固定液固定30min。

2、将PAGE胶转移至敏化液中，使染液没过PAGE胶，室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃

3、弃去敏化液，用去离子水漂洗三次，每次10min。

4、将PAGE胶转移至硝酸银染液中，使染液没过PAGE胶，室温摇晃40min。

5、将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃，该显色一般在10min左右，。

6、再选择合适的时间进行终止，弃去显色液，加入终止液即可。后可进行信号收集保存。

注意事项：

    1、银染主要出现在PAGE胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。

    2、对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰

       银染，因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸*洗净。

    3、不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比

       例。

    4、染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.

    5、凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程中都应带手套操作。

    6、PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。  

    7、如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够*，

      或是染色过程时温度太低。

     8、较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。

     9、PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质会干扰银染。

     10、室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。

     11、凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。

     12、染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。

     13、银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。

     14、银染容器较理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。

     15、试剂如有沉淀析出，混匀溶解（可加热）后室温使用。

AA0117 PAGE凝胶银染试剂盒