一、细胞复苏的原理

细胞复苏的原理是基于将细胞从液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢复活力的技术。遵循“快融”原则，短时间内融化胞外结晶，避免缓慢融化导致水分渗入胞内形成胞内再结晶损伤细胞，融化越快，细胞损伤越小。

二、细胞复苏的小Tips

1. 为防止冻存管在水浴锅中升温时突然爆炸，可以在放入水浴锅前先在生物安全柜中把盖子拧松一下然后再拧上。

2. 从液氮罐里拿出细胞不必急于放入水浴锅中，因为细胞从液氮的-196℃上升到-80℃这个过程对细胞是没有损害的，我们有足够的时间处理。但是，一旦细胞融化，应立即将其转移至预先准备的培养基中，以稀释细胞冻存液中的DMSO，因为在常温下高浓度DMSO对细胞的损害较大。

3. 解冻细胞时不必等待细胞完quan融化才从水浴锅中取出，当观察到冰块浮起来即可。此外，水浴时间应尽量不超过1分钟，整个解冻过程尽量在3分钟内完成

4. 将解冻的细胞转移至培养基中时，应确保操作迅速并避免污染。通过这些注意事项和技巧的应用，可以有效地提高细胞复苏的成功率和细胞的活力。我们首先将已经融化的部分转移到含有新鲜培养基的离心管中。接着，从离心管中吸取少量的培养基到冻存管中。这时，剩余的冰块会迅速融化。然后，我们将这些融化后的液体全部转移回离心管，进行离心，以去除上清液（这样做是为了去除DMSO）。之后，我们加入新鲜的培养基，轻轻摇晃，使其混合均匀，然后接种到培养瓶中进行培养。细胞复苏后，对于贴壁细胞，复苏24小时后，我们会在显微镜下观察。如果细胞的密度达到了80%，那么就可以进行正常的传代培养。如果密度还没有达到80%，那么我们就会继续培养，直到48小时后再进行换液。

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