WB实验中的蛋白酶抑制剂
时间:2024-09-24 阅读:466
一、WB实验中的蛋白酶抑制剂作用
WB实验中的蛋白酶抑制剂主要是在蛋白质提取过程中,防止蛋白质水解,从而保持蛋白质的完整性。在蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶,这些酶在与欲提取的蛋白质接触时,一旦条件适宜,就会发生反应,导致蛋白质分解。
二、WB实验中的蛋白酶抑制剂的作用原理
蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合,使蛋白酶活力下降,甚至消失,但不使酶蛋白变性的物质。
三、WB实验中的蛋白酶抑制剂的使用条件
1. 因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
2. 由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,应注意在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂时应充分混匀,以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
四、常用的蛋白酶抑制剂的分类
1.苯甲基huang酰氟化物( PMSF)
2. 乙二胺四乙酸钠( EDTA-Na2 )
3.胃蛋白酶抑制剂
4.亮抑蛋白酶肽
5.胰蛋白酶抑制剂
6.抑胃肽
7.胱蛋白酶抑制剂
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