在医学临床、生物学研究上，用于测定各种各样的抗原、半抗原和抗体，Elisa法为杂交瘤细胞株的筛选提供了简便、灵敏、快速的测定方法。那让我们一起来看看抗体抗原测定的Elisa方法吧！

　　抗体抗原测定的Elisa方法一：直接法

　　1、将抗原吸附在固相载体表面；

　　2、添加一种封闭试剂，防止检测抗体出现非特异性结合；

　　3、添加直接偶联某种酶（如HRP）的检测抗体。该检测抗体将结合抗原，并且剩余的抗体会从孔中洗掉；

　　4、添加这种酶的底物；

　　5、短暂孵育后，在酶标仪上测定每个孔的信号。

　　抗体抗原测定的Elisa方法二：间接法（测定抗体效价）

　　1、首先将过量的抗原加入聚苯乙烯微量反应板的四孔中进行吸附，洗涤除去未吸附抗原；

　　2、将待测抗体（一抗）溶液加入反应凹孔，温育，形成抗原-抗体复合物，洗涤除去未结合的杂蛋白；

　　3、加酶标记抗抗体（二抗），温育后洗涤除去未结合的酶标记物；

　　4、加入底物生成有色产物，加终止液终止酶促反应，日测或用酶标仪测定吸光值，计算第一抗体量。酶标第二抗体是将第一抗体免疫另一种动物，将抗体纯化再与酶交联而成的。

　　抗体抗原测定的Elisa方法三：夹心法（测定抗原量）

　　1、将抗原免疫第一种动物获得的特异性抗体的免疫球蛋白加入聚苯乙烯微量反应板的凹孔中进行吸附，洗涤除去未吸附抗体；

　　2、将待测抗原溶液加入反应凹孔，温育形成抗原-抗体复合物、洗涤除去未结合的杂蛋白；

　　3、再加抗原免疫第二种动物获得的的特异性抗体，经温育形成抗体-抗原-抗体复合物，洗涤；

　　4、加入抗第二种动物抗体的酶标记抗体，温育后洗涤除去未结合的酶标记物；5、加底物生成有色产物，终止酶促反应，用酶标仪测定吸光值，经计算得到抗原量。

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