荧光素是一种常见的生物发光报告物，用于对荧光素酶的表达进行体内成像。这种萤火虫荧光素酶的水溶性底物利用ATP和Mg2+作为辅助因子，在有氧的情况下发出特征性的黄绿光，在37°C的活体环境中转变为红光。通过利用ATP，该反应可进一步用于指示能量或生命的存在，从而起到生死染色的作用。
 

　　D-荧光素钾盐是生物技术领域常用的试剂，特别适用于体内成像。通常会将荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染性疾病接种到大鼠或小鼠等研究动物体内进行研究。注射D-荧光素钾盐后，可通过生物发光成像(BLI)对这些模型系统中的疾病进展和/或药物疗效进行实时、非侵入性监测。
 

在体内成像检测方面，D-荧光素钾盐如何使用呢？让我们一起来看看吧！
 

　　一、D-荧光素钾盐的配制
 

　　1. 所需材料：D-荧光素钾盐、DPBS(不含Ca2+、Mg2+)、0.2 µm注射器过滤器
 

　　2. D-荧光素钾盐配制
 

　　(1)在室温下解冻D-荧光素(钾盐或钠盐)并溶解在DPBS(不含钙、镁)中，最终浓度为15 mg/mL。
 

　　(2)使用5-10 mL无菌H2O预湿0.22 µm过滤器，然后倒掉水。
 

　　(3)利用准备好的0.22 µm注射器过滤器对荧光素溶液进行灭菌。
 

　　二、D-荧光素钾盐体内成像检测流程(以小鼠腹腔IP注射为例)
 

　　1. 固定小鼠并倾斜，使头部朝下，腹部暴露。
 

　　2. 用70%乙醇消毒注射部位。
 

　　3. 建议使用25-27号针头进行腹腔注射。将针头以约30度角插入腹部。
 

　　4. 针头杆应插入约半厘米(4-5 mm)的深度。
 

　　5. 稍微抽吸以确保针头没有刺穿血管、肠道或膀胱。
 

　　a. 绿褐色抽吸物表示针头刺穿肠道。
 

　　b. 黄色抽吸物表示针头刺穿膀胱
 

　　6. 如果抽吸出任何液体，则溶液已被污染，必须丢弃并使用新的注射器和针头重复上述步骤。
 

　　7. 如果没有抽吸出液体，则可以继续注射。
 

　　8. 拔出针头，等待10-20分钟再进行成像以获得最大荧光素酶信号平台期。(具体的信号峰值时间需要进行预实验确定。)
 

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