默瑞生物推出--RPA引物、探针设计服务
时间：2022-11-25 阅读：1636
2006年Piepenburg等研发的重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification，RPA），该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测。
RPA反应由3种关键酶（重组酶Uvs X、单链结合蛋白Gp32以及链置换DNA聚合酶）、能量供应体系（三磷酸腺苷、磷酸肌酸以及肌酸激酶）、稳定反应体系（Tris、醋酸钾、高分子量聚乙二醇以及二硫苏糖醇等）、三磷酸脱氧核糖核苷酸（deoxyribonucleotide triphosphate，dNTP）、醋酸镁等成分组成。
RPA技术反应原理
RPA反应基本原理如下图，主要包含5个阶段：
（1）在三磷酸腺苷供能的条件下，重组酶辅因子（Uvs Y）协助Uvs X与反应体系中的引物结合，形成酶-引物复合体，该复合体在反应体系中寻找双链DNA同源序列［3］；
（2）在同源序列处发生链交换反应形成D环结构，同时Gp32与被置换的DNA单链结合进一步稳定D环结构；
（3）Uvs X从酶-引物复合体中解离，DNA聚合酶识别引物游离的3′-OH端，添加dNTPs启动扩增反应；
（4）模板母链分离，DNA子链合成；
（5）两DNA子链合成完毕。该过程不断循环实现检测靶标的指数扩增直到反应体系中能量消耗殆尽。
重组酶聚合酶扩增反应原理图
影响RPA扩增的关键因素：引物和探针设计
目前，仍没有一款专用的软件可供用户设计RPA反应所需的引物和探针。RPA引物、探针设计对RPA反应有重要影响，RPA引物长为30~35个碱基，不同引物、探针组合有不同的扩增效率，为达到实验预期，进行多次筛选是必要的。探针碱基错配将影响扩增效率，出现假阳性结果并总结了荧光检测法探针的要点（荧光基团与淬灭基团之间1~2个碱基，尽可能降低G含量等）。
默瑞生物推出RPA引物/探针设计服务
基于多年来默瑞生物对Twistdx RPA相关产品的市场推广工作，我们有多年丰富经验的技术服务团队。应广大科研工作者的实际需求，推出以下服务项目。
客户可根据自己需求填写提供信息（表1），并选择如下以下服务方案（表2）：
表1：
| RPA检测方法 | |
| Basic（普通电泳法）、 | |
| exo（荧光定量法） | |
| fpg（荧光定量法） | |
| nfo（试纸条法） | |
| 检测靶标信息 | |
| 序号 | 物种名称 | 基因名称 | 基因信息（NCBI登录号） | 靶序列信息 |
表2：
| 方案 | 靶标 | 引物 | 探针 | crRNA | 设计周期 |
| 1 |
| 1周 | |||
| 2 |
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| 2周 | ||
| 3 |
|
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| 3周 | |
| 4 |
|
|
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| 4周 |
方案1：甲方提供物种名称，乙方提供该物种的诊断靶标基因名称、基因信息（NCBI登录号）、靶标基因序列信息；并出具电子版靶标基因序列信息报告一份；
方案2：甲方提供物种名称，乙方提供该物种的诊断靶标基因名称、基因信息（NCBI登录号）、靶标基因序列信息，同时乙方针对该靶点设计出三对引物供甲方筛选，并出具电子版引物信息报告（含引物特异性分析）；
方案3：甲方提供物种名称，乙方提供该物种的诊断靶标基因名称、基因信息（NCBI登录号）、靶标基因序列信息，同时乙方针对该靶点设计出三对引物和一条探针供甲方筛选，并出具电子版引物信息报告（含引物特异性分析）；
方案4：甲方提供物种名称，乙方提供该物种的诊断靶标基因名称、基因信息（NCBI登录号）、靶标基因序列信息，同时乙方针对该靶点设计出三对引物、一条探针和三条相对应的CRISPR-RNA（crRNA）供甲方筛选，并出具电子版引物信息报告（含引物特异性分析）；
方案5：甲方提供物种名称，乙方提供全套的RPA或RPA-CRISPR技术服务，包括诊断靶标的基因筛选、引物和探针的设计、特异性和灵敏度实验验证、实际样品检测及验证等。
交货期：自合同生效之日起3个月内。默瑞生物。
默瑞生物
默瑞生物创立以来，已经陆续导入TwistDx，enzymatics，KAPA BIOSYSTEMS，BioDynami，Jackson，Echelon，ChromoTek，Nanocs，Biotechrabbit，Lee Biosolutions, magtivio等优质国际品牌，逐步培育成为专业用户的选择。
产品包含核酸和蛋白两大产品线。
(1)核酸产品线提供从样品破碎仪，核酸质控，核酸电泳，凝胶成像，到质粒纯化Kit，快速内切酶，T4 DNA连接酶，PCR Mix等，给您的核酸研究工作带来方便快捷全新的体验。
(2)蛋白产品线提供从样品处理到蛋白定性，定量，到蛋白Mark，封闭液，PBS，化学发光成像仪，产品做到很好，追求好的客户体验，是我们的理念。
代理仪器产品有：Leica显微系统，Merck Millipore实验室纯水超纯水仪及配套耗材，Roche实时定量PCR仪，Partec流式细胞仪等。
代理试剂产品有：TwistDx恒温扩增试剂盒，Echelon脂类研究试剂，KAPA BIOSYSTEMS二代测序试剂， Enzymatics二代测序酶，Jackson ImmunoResearch抗体，ChromoTek荧光蛋白及抗体，Horizon Discovery测序标准品，Biomatik公司Elisa试剂盒，Nanocs PEG修饰剂，Spectrumlabs透析袋，Polysciences微球，JenaBioscience分子试剂，Lifespan Technologies硫酸葡聚糖ELISA试剂盒及抗体，Lee Biosolutions抗体，Emfret心血管研究抗体，Magtivio B.V.DNA提取磁珠，Biontex Laboratories转染试剂，Canvax™细胞凋亡检测试剂盒，Matriks Biotek®生物药物检测试剂盒，Immunostep流式细胞术抗体，Fuller Laboratories感染性疾病检测试剂盒，SICGEN抗体，biotechrabbit酶及抗体等。