两种乙酰胆碱受体自身抗体检测法比较：酶联免疫法与放射免疫法
时间：2022-03-28 阅读：1560
烟碱型乙酰胆碱受体自身抗体(AChR Ab)是重症肌无力(MG)的重要血清学标志物，血清中AChR Ab的检测对MG的诊断和治疗有重要意义。本文比较了两种测定AChR Ab的方法：放射免疫法（IPA）和酶联免疫法（竞争ELISA）。
在本研究中，在83例MG患者血清中，76例血清在ELISA法中呈阳性 (阳性率92%)，72例在IPA法中呈阳性 (阳性率87%)；在193例对照血清（疾病对照组和健康对照组）中，191/193例（99%）呈阴性，2例其他自身免疫性疾病的患者血清呈阳性（在对照组中，ELISA法和IPA法的结果一致）。
RSR的AChR Ab竞争ELISA法与现有金标准-放射免疫法特异性相同，灵敏度更高。此外，竞争ELISA的精密度和操作特性使其适用于大批量和小批量样品的常规测定。
入组样本
1） MG疾病组：83例MG患者的血清（IPA检测的AChR Ab浓度范围在0.14到21 nmol/L 毒素结合量）；
2）疾病对照组：93例其他自身免疫性疾病患者的血清（包括42例Graves病患者血清TSHR (TR Ab)自身抗体阳性，11例桥本甲状腺炎患者血清甲状腺过氧化物酶自身抗体(TPO Ab)和/或甲状腺球蛋白自身抗体(Tg Ab)阳性，10例1型糖尿病（DM）患者血清谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD Ab)阳性，10例阿狄森氏病（AD）患者血清类固醇21-羟化酶自身抗体(21-OH Ab)阳性，10例类风湿关节炎(RF)患者血清类风湿因子(RFA)阳性，10例系统性红斑狼疮(SLE)患者血清双链DNA自身抗体(dsDNA Ab)阳性）。
上述患者组的标志物中，除类风湿因子使用Behring试剂盒测定外，其他自身抗体均采用RSR公司的试剂盒检测。
3）健康对照组：100例健康献血者(HBD)的血清（美国，Golden West）。
结果
01 ELISA法和IPA法对比
总体而言，在MG疾病组的检测上，两种检测方法（ELISA法和IPA法）的结果吻合良好(r=0.85, n=83, p<0.001)（图1）。
图1 ELISA和放射免疫法（IPA）AChRAb检测结果的相关性分析。y=0.31510.0364x；r=0.85；n=83。（A） 全尺寸。（B） 局部放大图。水平和垂直虚线分别显示ELISA和IPA临界值。
02 灵敏度分析
83例MG患者血清中有80例 (96%) 在一种或两种检测中均呈阳性。在83例MG患者血清中，76例血清在ELISA法中呈阳性 (阳性率92%)，72例在IPA法中呈阳性 (阳性率87%)。与IPA法（n =72）相比，使用ELISA 法(n=76)检测到更多的MG患者样本呈AChRAb阳性（表1）。
表1 在83例MG组中IPA和ELISA法的检测结果
差异样本分析：
ELISA阳性，IPA阴性：8例血清在ELISA法中呈阳性(抑制率范围为18 ~ 46%)，而在IPA法中呈阴性(0.33 ~ 0.47 nmol/L毒素结合量)。
ELISA阴性，IPA阳性：4例血清样本在IPA法检测中呈阳性(0.56、0.61、1.44和2.91 nmol/L毒素结合量)，在ELISA检测中呈阴性(抑制率分别为14%、15%、8%和-1%)。在4个血清样本中，其中两例的双方法学检测结果都处于临界值附近；另外两例在IPA结果中，为AChR Ab弱阳性值 (1.4 和2.9 nmol/L)，这两个样本在IPA法检测时被发现与胎儿型乙酰胆碱受体结合（数据未显示），可能表明这两个样本中的AChR Ab结合到了我们ELISA实验中使用的3种单抗无法识别的位点上。
03 特异性分析
在其他疾病对照组和健康对照组的检测中，ELISA法和IPA法的定性结果始终保持一致。
其他疾病对照组：在93例其他自身免疫性疾病患者（详情见前面入组样本部分）中，91/93例（特异性 98%）患者检测结果为AChRAb阴性。两例患者检测结果为AChRAb阳性，分别为一例Graves病患者(ELISA法显示28%抑制率，IPA法结果为1.3nmol/L 毒素结合量 )和一例系统性红斑狼疮(SLE)患者(ELISA法显示44%抑制率，IPA结果为1.3nmol/L 毒素结合量)。
健康对照组：100例健康供血者中，100例（特异性 100%）均为抗体阴性。
03 批内和批间精密度分析
竞争法AChR Ab酶联免疫吸附试验的批间变异系数(CV)如下：
竞争法AChR Ab酶联免疫吸附试验的批间和批内变异系数(CV)结果显示，低浓度样本的批间和批内差大于高浓度的样本，是由于低浓度样本的平均值偏小，CV的计算公式为标准差除以平均值。
原文：Hewer R , Matthews I , Shu C , et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies[J]. Clinica Chimica Acta, 2006, 364(1-2):159-166.
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