一、准备工作

1. 选择合适的生物指示剂

• 根据灭菌物品的性质和灭菌工艺要求，选择含有合适微生物的生物指示剂。通常环氧乙烷灭菌生物指示剂含有枯草芽孢杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢，这种芽孢对环氧乙烷的耐受性较强，能有效反映灭菌效果。

• 同时，要考虑生物指示剂的包装形式，如自含式生物指示剂（内部包含菌片、培养液和培养容器）和非自含式生物指示剂（菌片和培养液分开），根据实际使用场景和便捷性进行选择。

2. 检查生物指示剂完整性

• 仔细查看生物指示剂的包装，确保包装没有破损、裂缝或其他损坏迹象。如果包装损坏，可能会导致芽孢失活或者受到污染，从而影响监测结果的准确性。

二、放置生物指示剂

1. 确定放置位置

• 对于灭菌物品，将生物指示剂放置在最难灭菌的部位。例如，在灭菌复杂的医疗器械套装时，要将生物指示剂放置在器械的内部通道、关节处或多层包装的中心位置。如果是多孔物品，要确保生物指示剂位于物品的内部孔隙中，以模拟环氧乙烷气体最难穿透的情况。

• 对于大型灭菌设备，如环氧乙烷灭菌柜，若灭菌物品较多且分布在不同层次和位置，应在不同的位置放置生物指示剂，包括上层、中层、下层，以及靠近柜门和后壁等位置，以全面监测灭菌效果。一般来说，每一个灭菌批次至少要放置一个生物指示剂。

三、进行灭菌操作

1. 按照正常灭菌程序操作

• 将放置好生物指示剂的灭菌物品放入灭菌设备，然后按照既定的环氧乙烷灭菌参数进行灭菌。这些参数通常包括环氧乙烷浓度（一般为 450 - 1200mg/L）、温度（37 - 63℃）、相对湿度（40% - 80%）和时间（1 - 6 小时不等，具体取决于灭菌条件和物品性质）。

四、培养生物指示剂

1. 灭菌后取出

• 灭菌过程结束后，等待灭菌设备内的环氧乙烷气体充分排出，压力降至零，然后打开灭菌设备，小心取出生物指示剂。在取出过程中，要避免生物指示剂受到二次污染。

2. 进行培养

• 自含式生物指示剂：如果是自含式生物指示剂，按照产品说明书进行操作，通常是通过挤压或折断某个部位，使菌片与培养液接触，然后将生物指示剂放入专用的培养设备中。培养温度一般设定为 30 - 37℃，这是枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢能够生长的适宜温度。培养时间通常为 24 - 72 小时，具体时间根据生物指示剂的说明书确定。

• 非自含式生物指示剂：对于非自含式生物指示剂，将菌片放入合适的培养液中，培养液要含有芽孢生长所必需的营养物质，如碳源、氮源、无机盐等，并且要具备指示芽孢是否生长的功能（如含有酸碱指示剂）。将装有菌片和培养液的容器放入培养设备，培养条件同自含式生物指示剂。

五、结果判断

1. 阳性结果判断

• 如果在培养规定时间后，生物指示剂中的培养液颜色发生变化（如由紫色变为黄色），并且有微生物生长的迹象（如培养液变浑浊），则判定为阳性结果。这表明灭菌不彻di，灭菌过程失败。

2. 阴性结果判断

• 如果培养后，生物指示剂中的培养液颜色保持不变（如仍为紫色），且没有微生物生长的迹象（培养液清澈），则判定为阴性结果。这意味着灭菌有效，达到了预期的灭菌效果。

3. 记录和报告结果

• 将生物指示剂的测试结果详细记录下来，包括灭菌批次、灭菌日期、培养日期、结果（阳性或阴性）等信息。如果出现阳性结果，需要及时报告相关部门，并对灭菌设备和灭菌过程进行检查和重新评估，以确定灭菌失败的原因并采取纠正措施。