神经递质类氨基酸是人体内的重要组成物质，参与各种代谢途径，可通过调控中枢神经元的兴奋或抑制，参与神经元信息传递、认知、学习和记忆等过程。神经递质类氨基酸主要有γ-氨基丁酸、天冬氨酸和天冬酰胺等，可分为兴奋性和抑制性两类，兴奋性神经递质类氨基酸包括天冬氨酸等，抑制性神经递质类氨基酸包括 γ-氨基丁酸等。γ-氨基丁酸参与调节学习和记忆过程[8−9] ，γ-氨基丁酸还能改善睡眠和预防抑郁 ，天冬氨酸与智能、情绪和警觉性有关。天冬酰胺可通过天冬酰胺合酶由天冬氨酸合成，该酶的缺陷会导致大脑结构异常和认知障碍。

神经递质类氨基酸不仅在神经系统中发挥着重要的作用，在非神经系统中也有重要的生理意义。γ-氨基丁酸能调节免疫、保护和改善胰岛功能。人类饮食不仅直接影响身体状况，也会影响大脑功能和精神状态。食品是神经递质类氨基酸的天然来源，饮食调整和补充在神经疾病等许多疾病的治疗中有积极的作用。神经递质类氨基酸广泛存在于食品中，其中黄豆、黑豆、红小豆和绿豆等豆类食品不仅含有丰富的神经递质类氨基酸，同时也是人们膳食中普遍常见且需要的部分。因此，建立 黄豆、黑豆、红小豆和绿豆这 4 种豆类食品中神经递质类氨基酸的检测方法非常有必要。

目前，氨基酸和神经递质的检测方法主要有高效液相色谱（HPLC）法、液质联用（LC-MS） 法、离子色谱法、气质联用（GC-MS）法等。其中，液相色谱法和气质联用法检测氨基酸需要做柱前衍生化处理，前处理过程复杂，而氨基酸自动分析仪法耗时比较长。

实验方法

标准溶液的配制　

分别称取适量的天冬氨酸、天冬酰胺和 γ-氨基丁酸标准品用超纯水配制成 1 mg/mL 单标标准品储备液，储存于 4 ℃ 冰箱中。取适量各标准储备液，用超纯水稀释成 0.5 mg/mL 混合标准溶液，用于绘制标准曲线。

液相色谱条件　

色谱柱：Agilent Zorbax SB-Aq RRHT（3.0 mm×100 mm, 1.8 μm）；柱温：25 ℃；

流速：0.3 mL/min；进样量：1 μL。流动相为：A 为 0.5 mmol/L 乙酸铵水溶液，B 为甲醇；梯度洗脱程序：0~1 min, 30% B；1~2 min，30%~90% B；2~3 min，90% B；3~4 min，30% B。

色谱柱的选择　

分别使用 SB-C18（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm）、Zorbax SB-Aq RRHT（3.0 mm×100 mm, 1.8 μm）和 Eclipse Plus C18 RRHD（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm）三种不同的色谱柱对 1 μg/mL 的天冬氨酸、天冬酰胺和 γ-氨基丁酸混合标准品溶液进行检测，考察色谱柱对目标化合物的分离效果及峰形的影响。

流动相的优化　

首先分别使用水-甲醇和水-乙腈作为流动相进行检测，考察对目标化合物响应强度的影响，然后分别使用 0.1% 甲酸水溶液-甲醇、0.5 mmol/L 乙酸铵水溶液-甲醇作为流动相进行检测，考察对目标化合物分离度和峰形的影响。

柱温的选择　

分别使用 20、25、30、35、40、45 ℃ 柱温进行检测，考察柱温对目标化合物响应强 度的影响。

质谱条件　

离子源：电喷雾电离源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；监测模式：多反应监测（MRM）；离子源温度：550 ℃；离子化电压：4500 V；雾化气（N2 ）压力：55 psi；气帘气（N2 ）压力：35 psi；辅助加热气 （N2 ）为 55 psi；

样品前处理，采用水作为溶剂，超声提取目标化合物。分别称取粉碎后过 60 目筛的黄豆、黑豆、红小豆和绿豆粉末 2.5 mg 于 1.5 mL 离心管中，加入 1 mL 超纯水，涡旋混匀后，超声提取 30 s，以 13500 r/min 离心 10 min，取上清液经 0.22 μm 滤膜过滤，供 UPLC-MS/MS 分析。