利用高效液相色谱检测抗菌素—虫草素的相关案例
时间：2022-09-06 阅读：532
虫草素又被称为虫草菌素、蛹虫草菌素，是第一个从真菌中分离出的核苷类抗菌素。20世纪50年代，野生蛹虫草在吉林长白山一带被发现，研究证实其成分功效远超野生冬虫夏草，故而命名北冬虫夏草；1951年，德国科学家等发现蛹虫草核心成分“虫草素”，发现其具有多种药理活性，至今虫草素在新药研制、保健等多领域备受关注。
虫草素的检测方法以高效液相色谱为主，包括正相、反相、质谱联用等，还有毛细管电泳法等。微源检测经查阅文献分享一种利用高效液相色谱法（HPLC）测定冬虫夏草中虫草素含量的检测方法。
方法选择合适色谱柱，流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱0～3min，检测波长260nm，柱温35℃，进样量10μL。以保留时间定性，峰面积定量，计算虫草素含量。精密量取虫草素对照品4.76mg，置入10mL量瓶，加水适量，使溶解，用水稀释至刻度，制成浓度为0.476mg／mL的对照品贮备液，取贮备液1.0mL，置入10mL量瓶，加水定容至10mL，得浓度47.6μg／mL的虫草素对照品溶液。
准确称取冬虫夏草1g，用1％乙酸溶液浸泡过夜，37℃超声提取30min，过滤，收集滤液并用1％乙酸溶液定容至10mL。取2mL，加入乙腈2mL，沉淀蛋白，离心，取上清冻干，加水1mL溶解，0.45lam微孔滤膜滤过得到供试品溶液，待测。
供试品溶液进样测定，得到色谱峰。对线性关系精密度、重复性稳定性依次进行检测。以进样浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得回归方程和相关系数得到在范围内的浓度与峰面积呈良好线性关系，计算虫草素的峰面积RSD表明实验的精密度良好稳定性质良好。
准确称取已知虫草素含量的冬虫夏草样品6份，分别精密加入47.6μg／mL的虫草素对照品溶液0.5mL，将供试品溶液，按调试好的色谱条件测定，计算回收率。取冬虫夏草药材，将供试品溶液，按调试好的色谱条件测定。得到不同产地冬虫夏草虫草素的含量。
利用虫草素的理化性质，方法选用乙腈-水作为流动相系统，梯度洗脱分离虫草素，可以将虫草素与杂质进行很好的分离，色谱峰的对称度和分离度较好，峰形窄且对称。高效液相色谱技术不断发展成熟，相关的检测研究日渐增多。实验室遵照ISO17025和GMP进行实验室管理，专注为药品生产过程中可能产生的杂质提供评估报告、方法开发、验证及样品检测等一系列完整的解决方案。更多检测问题欢迎私信及评论区留言！
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