肾上腺和性腺类固醇的尿代谢物分析已经常规进行了大约 30 年，定义了一种在全球范围内用于研究和临床诊断的方法，也被扩展到毒理学领域。在临床上，这种分析已广泛用于先天性代谢缺陷的诊断，*近还用于肾上腺肿瘤的鉴别诊断. *初，通过气相色谱 (GC) 和火焰离子化检测器 (FID) 等检测器测定类固醇的甲氧基胺-三甲基甲硅烷基衍生物的概况，但*近通过单四极杆质谱仪 (MS) 鉴定了类固醇。MS 的使用增强了 FID 的特异性，但挑战依然存在。类固醇及其代谢物的数量在分析物和疾病状态之间差异很大，这意味着校准范围可能会有很大差异。尤其是一些类固醇的含量较低（例如皮质醇），并且接近可接受的定量限 (LOQ)，即使在提取相对大量 (~20 mL) 的尿液之后也是如此。

使用串联质谱 (MS/MS) 可以改善信噪比，从而降低 LOQ。*近，液相色谱 (LC)-MS/MS 已成为定量分析的优选方法。由于通常不需要衍生化，因此可以获得更高的通量。尽管电离效率较差，但一些中性类固醇可以通过电喷雾 (ESI) 和大气压化学 (APCI) 电离成功量化，尽管它们的信号容易受到基质离子抑制的影响。尽管如此，更丰富的循环孕烯和雄烯类固醇，如皮质醇和睾酮，现在通常通过这种方式进行量化。然而，它们的代谢产物，其中一些保留了生物活性, 无法使用 LC-MS/MS 轻松检测或区分。A 环中酮烯醇功能的代谢形成 5α 和 5β 还原的二氢产物，随后 3-酮被 3α 和 β-羟基类固醇脱氢酶还原并产生离子化不佳的代谢物。此外，LC 对多组立体异构体的分离是有问题的。