科研指南:ELISA试剂盒标本处理的技术问题
时间:2018-03-01 阅读:226
在ELISA检测实验中,检测标本是影响实验结果的关键因素之一。今天上海沪鼎为您分享的内容是ELISA检测试剂盒标本处理过程中的技术问题,希望可以给您的ELISA试剂盒实验带来帮助。
一、标本溶血
由于各种人为原因引起的标本溶血,均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,ELISA试剂盒干扰测定结果。为克服上述干扰作用,标本采集时必须注意避免溶血。
二、标本受细菌污染
因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
三、标本保存不当
在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;标本放置时间过长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性。为克服上述干扰,ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5天内测定的血清标本可存放于4℃,ELISA试剂盒1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。
四、标本管中添加物质的影响
抗凝剂、酶抑制剂及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。
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