氮磷钙测定仪操作说明书

 NPCa-02型氮磷钙测定仪是在KDN型定氮仪的基础上，改进设计，研制而成的。

氮磷钙消化装置在150℃--500℃范围内任意调节，同时只要将催化剂硫酸铜和硫酸钾换成双氧水。将消化液定容后分别可测定粗蛋白、磷和钙的含量。这种催化剂既有较快的消化速度，在消化液中又不留干扰物质影响粗蛋白、磷、钙的测定仪。在测定钙时用乙二胺四乙酸二钠盐法，即EDTA法（GB6436-86），从而巧妙地实现了一次消化，连续测定的实用性，可谓一举多得。其测定结果与原国家标准相符，经有关专家鉴定，认为该仪器不仅测定速度快，操作简便，重现性好，度高，而且可提高工作效率2-3倍，节电60-70%左右，节约试剂20%左右。对改善分析人员工作环境，减轻劳动强度都有积极作用，是各饲料厂用作日常检测的理想设备。

• 工作原理：

H₂SO₄和H₂O₂都是强氧化剂，在高温下放出新生态氧（O），使样品中有机物分解，放出CO₂、SO₂、NH₃及各种元素，其中CO₂、SO₂释放到空气中，NH₃与H₂SO₄结合成（NH₄）₂，SO₄、P、Ca等各种无机离子均能固定在消化液中。

粗蛋白质测定是硫酸氨在强碱条件下蒸馏，使氨逸出用硼酸吸收后用标准酸滴定测定氮的含量，乘以换算系数为粗蛋白含量；

磷的测定是磷在酸的条件下，与矾钼酸铵作用，形成黄色矾酸络合物，在420nm波长下比色其含磷量与吸光度成正比；

钙的测定是EDTA返滴定法，在待测液中先加入已知量的EDTA标准液，然后调节PH值为12-14，以铬兰黑R（钙试剂）为指示剂，并用标准钙溶液返滴定过量的EDTA，终点由兰色变成灰红色，由此计算钙含量。

• 技术指标：
  • 测定范围：适用于粮食、食品、饲料、乳制品及其他农副产品中，粗蛋白、磷、钙含量的测定。
  • 测定样品：消化样品一次同时可消化4个。
  • 重现性，平行试验结果：蛋白质符合GB9511-85、GB632-85规定范围之内，磷符合GB6437-86规定范围之内。钙符合GB6432-86规定范围之内。
  • 电源：220V 50Hz
  • 额定功率：消化装置：1200KW
• 操作说明：
  • 仪器和用具
  • NPCa-02型氮磷钙测定仪
  • 分析天平：感量0.0001g
  • 实验用粉碎机和研钵
  • 分样筛：孔径0.45mm（40目）
  • 酸式滴定管：25ml或50ml
  • 锥形瓶：200ml
  • 定容瓶：100ml和1000ml
  • 刻度移液器：10ml
  • 分光光度计：10mm比色池，可在420nm下测吸光度
  • 容量瓶或具比色管50ml
  • 试剂

2.1 双氧水：分析纯30%

2.2 氢氧化钠：化学纯40%溶液

2.3 硼酸：分析纯2%水溶液

2.4 混合指示剂：0.1%甲基红、0.5%溴甲酚绿乙醇溶液，二种溶液等体积混合，用棕色瓶贮存于阴凉处。

2.5 盐酸：分析纯0.05mol/L盐酸标准溶液，4.2ml分析纯浓盐酸注入1000ml蒸馏水中，用碳酸钠法标定。

0.1mol/L盐酸标准溶液，8.3ml分析纯浓盐酸注入100ml蒸馏水中，用碳酸钠法标定。

2.6 浓硫酸：（GB625-77）含量98%无氮

2.7 钒钼酸铵显示剂：

称取偏钒酸铵（NH₄VO₃）（HG₃--942）分析纯1.25g加硝酸化学纯250ml，另取钼酸铵分析纯25g加蒸馏水400ml溶解，在冷却的条件下，将此溶液倒入上溶液，加蒸馏水定容至1000ml避光保存，如生成沉淀则不能使用。

2.8 标准磷溶液：

将磷酸二氢钾KH₂PO₄（GB1274）分析纯在105℃干燥2h，在干燥器中冷却后，称取0.2195g，在1000ml容量瓶中，溶于蒸馏水中加硝酸化学纯3ml，用蒸馏水定容至刻度，配成50ug/ml的标准磷溶液。

2.9 氢氧化钠（GB629）分析纯配成21%水溶液。

2.10 三乙醇胺：分析纯1:1水溶液。

2.11 乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠）（GB401）分析纯3.7g加蒸馏水溶成1000ml溶液，浓度0.01M。

2.12 钙指示剂：1g铬兰黑R与100gK₂SO₄研细混匀，贮于棕色瓶内。

2.13 钙标准溶液：

碳酸钙（分析纯）在105℃干燥4-6h，在干燥器内冷却后称取0.5g，溶于25ml0.5mol/L盐酸中煮沸溶解，除去CO₂定容至500ml。该溶液含钙量为0.4mg/mL，即0.01M浓度。钙克分子浓度M。可用下式计算：

M = G×0.4/(m * v)

式中：G---称样重（g）；

      m---钙分子量；

      V---体积（升）。

• 样品制备

取有代表性的样品，粉碎至40目筛通过，用四分法缩至200g，装于密封容器中备用

• 操作步骤

4.1 消化

4.1.1 消化前的准备

将抽气泵的外螺纹，同水咀的内螺纹固定牢，在排气管的尾端装上胶管，胶管的另一头装在抽气泵的横出口处，再在抽气泵的下端装上胶管，接通下水道开足水咀（注：出水胶管长度不得超出30cm，并不准弯曲），使抽气泵有足够的吸力。

4.1.2 消化操作

• 称取0.2-1g试样（含氮量0.1-160mg以含量定）准确至0.0001g干净无损失地转入清洗干净的100ml定容消化管中，加浓硫酸10ml摇匀。
• 将装有试样的定容消化管移在消化管架上，套在装有密封圈的排气管上将消化管上将消化管稍加旋转，使连接处保持密封良好，再装上弹簧夹。
• 手握排气管，连同装有试样的消化管一起移至消化炉上，使消化管在电炉中心位置，消化管底离电炉底10mm左右，接通电源根据需要开启开关将电压调至（220V或450℃）消煮20min左右，见H₂SO₄大量冒烟消化液呈酱油色，此时带上手套，将排气管连同消化管一起取出，置于消化管架上，稍加冷却，打开排气管上部瓶塞，逐个向消化管内加入双氧水2-3ml（加双氧水时用吸管逐滴加入，切忌在电炉上加双氧水，以防消化管破裂）后，将电压调至（120-150V或300℃），重新转入消化炉煮5min，仍用上法，向消化管内滴入双氧水直至消化液清澈透明，再移入消化炉，继续消煮15min（此时电压调回220V或450℃）取出，待消化液冷却至室温（冷却时排气管继续保持吸气状态，切忌放在冷水中冷却）再在消化管内加入蒸馏水至刻度（100ml），摇匀、待测。

4.2 粗蛋白测定（半微量蒸馏法）

4.3 在定容待测的消化液中，用移液管移出定量的消化液于干净的消化管内，蒸馏参照蛋白质测定仪（定氮仪）步骤操作。

4.4 滴定

吸收氮后的吸收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为灰紫色为终点。

4.5 空白测定

用0.1g糖代样品或不加样品做空白测定。

4.6测定结果计算

5 磷的测定

5.1 标准曲线绘制

准确吸取磷标准溶液（52ug/ml）0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0、15.0于50ml容量瓶中各加入钒钼铵显示剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度摇匀，放置10min以上，以0ml溶液为参比，用10mm比色皿，在420nm波长测各溶液的吸光度用磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

5.2 试样测定

准确吸取待测消化液2-10ml（视样品含磷量定，使光密度值不超过标准曲线范围）于50ml容量瓶中，以空白消化液作参比按绘制曲线同样步骤显色、比色，测得样品吸光度，由标准曲线查得样品含磷量。

5.3测定结果计算

6．钙的测定（EDTA）返滴定法

6.1 准确吸取待测消化液10ml于50ml锥形瓶，加蒸馏水40ml，三乙醇铵2ml，20%氢氧化钠7.2ml，边加边摇中和试样分解液的酸度，再加20%氢氧化钠2ml，使溶液的PH值达12-14，加钙指示剂0.1g左右，加入0.01MEDTA液10ml，此时溶液应呈蓝绿色（如是红色，说明分解液中钙的含量高，还要少吸取样品）然后用0.01M标准钙滴定过剩的EDTA，终点由蓝绿色变为紫红色，同时进行空白试样的测定。

6.2 结果计算