发酵设备灭菌安全操作步骤

湿热灭菌法

• 准备工作：

• 设备检查：检查发酵设备的完整性，包括罐体、管道、阀门、搅拌器、温度传感器、pH 电极、溶氧电极等部件是否正常，有无损坏或泄漏。同时确保所有的接口、连接部位都已密封好146.

• 清洁消毒：先将发酵罐内的残留物清除干净，可以使用冷水、热水、碱性清洁剂等进行清洗，然后用清水冲洗，去除清洗剂和残留物3.

• 电极处理：取下温度传感器、pH 电极、溶氧电极等敏感部件，温度传感器一般不需要灭菌；pH 电极灭菌前要标定，取下 pH 电缆线，盖上红色保护帽，将 pH 电极插到底并拧紧；溶氧电极用饱和的亚硫酸钠溶液标定 0 点，取下 DO 电缆线，DO 电缆接口处用锡箔纸包好，注意检查溶氧电极里头的保护液是否充足，不足则需添加148.

• 管道拆卸：拆下发酵罐上和冷凝器上的进、出水管，拆下的同时要用夹子夹住拆下水管的接头处，防止水流出；发酵罐上的过滤器两端要用夹子夹死，过滤器的出口处用锡箔包好148.

• 物料移除：将发酵罐内的培养基、发酵液等物料全部排出，并妥善处理，防止污染环境。

• 灭菌操作：

• 装锅：将预处理好的发酵设备放入灭菌锅中，注意不要使设备与灭菌锅内壁接触，避免局部过热。对于大型发酵罐，可能需要分段灭菌，将各部件分别放入灭菌锅的不同位置148.

• 通入蒸汽：打开蒸汽发生器入口阀门，启动蒸汽发生器，先将蒸汽发生器内的铁锈等杂质排出，然后关闭排水阀。慢慢打开蒸汽发生器主阀和夹套入口阀，向夹套内通入蒸汽，开始时蒸汽压力不稳定，压力表指针可能剧烈抖动，可适当关闭夹套入口阀，待压力稳定后再全开夹套出口阀，使蒸汽在夹套内循环，对发酵罐进行预热6.

• 升温升压：继续通入蒸汽，使灭菌锅内的温度和压力逐渐升高，一般要求温度达到 121℃，压力达到 0.105MPa 左右。升温过程中要注意观察温度和压力的变化，防止超温超压28.

• 保持时间：在达到设定的温度和压力后，保持 20-30 分钟，以确保灭菌。保持时间应根据发酵设备的大小、装载量、培养基成分等因素适当调整28.

• 冷却与后处理：

• 冷却降压：灭菌完成后，先关闭蒸汽发生器主阀，停止通入蒸汽，然后缓慢打开灭菌锅的排气阀，逐渐排出蒸汽，使灭菌锅内的压力和温度降低。降压过程要缓慢进行，防止因压力骤降导致发酵设备损坏或培养基沸腾溢出。

• 取出设备：当灭菌锅内的压力降至常压，温度降至 60℃以下时，方可打开灭菌锅取出发酵设备。取出时要佩戴防护手套，防止烫伤148.

• 部件安装与调试：将拆卸下来的部件如温度传感器、pH 电极、溶氧电极、进水管、出水管等按照正确的方法安装回发酵罐上，并检查各部件是否安装牢固，连接是否紧密。对溶氧电极进行标定，检查空压机的输出压力等参数是否正常148.

干热灭菌法

• 准备工作：

• 设备清洗与干燥：与湿热灭菌法的清洁消毒步骤类似，先将发酵设备清洗干净，去除内部的污垢和残留物，然后将设备晾干或用烘箱烘干，确保设备内无水分残留。

• 物品准备：将需要灭菌的发酵设备及部件放入干热灭菌箱中，注意物品之间要留有一定的空隙，以便热空气流通，保证灭菌效果。

• 灭菌操作：

• 设定参数：关闭干热灭菌箱门，打开电源，设定灭菌温度和时间。一般干热灭菌的温度为 160-180℃，保持 2-4 小时2.

• 开始灭菌：启动干热灭菌箱，开始加热升温，在灭菌过程中要密切观察温度的变化，确保温度稳定在设定范围内。由于干热灭菌的温度较高，时间较长，操作人员要注意防止烫伤，并避免在灭菌过程中打开灭菌箱门，以免影响灭菌效果。

• 冷却与后处理：

• 冷却：灭菌完成后，关闭干热灭菌箱电源，让设备在灭菌箱内自然冷却至室温。切勿在高温下取出设备，以免造成人员烫伤和设备损坏。

• 取出设备：待设备冷却后，方可打开灭菌箱门取出发酵设备。取出时要小心操作，防止碰坏已灭菌的设备和部件。使用前检查设备的完整性和性能是否正常。

化学灭菌法

• 准备工作：

• 设备清洁：先对发酵设备进行清洗，去除表面的污垢和杂质，确保设备表面干净光滑，以便化学药剂能够充分接触和发挥作用。

• 选择药剂：根据发酵设备的材质、污染程度以及灭菌要求，选择合适的化学灭菌剂，如甲醛、过氧乙酸等，并按照规定的浓度和用量进行配制2.

• 个人防护：操作人员要佩戴好防护手套、口罩、护目镜等个人防护用品，防止化学药剂对人体造成伤害。

• 灭菌操作：

• 密封设备：将发酵设备及相关管道密封好，确保化学灭菌剂能够在密闭的环境中充分发挥作用，提高灭菌效果。

• 导入药剂：按照一定的方法将配制好的化学灭菌剂导入发酵设备内。例如，对于甲醛熏蒸法，可以在容器中加热甲醛溶液使其挥发，或者使用甲醛发生器将甲醛气体导入设备及管路内；对于过氧乙酸熏蒸法，可以将过氧乙酸加热蒸发或使用喷雾器将过氧乙酸溶液雾化后导入设备及管路内2.

• 保持时间：保持一定的温度和湿度，让化学灭菌剂在设备内作用一定时间。一般甲醛熏蒸需要保持 8-12 小时，过氧乙酸熏蒸需要保持 2-4 小时2.

• 后处理：

• 通风换气：灭菌完成后，要对发酵设备进行充分的通风换气，以去除残留的化学灭菌剂。通风时间要足够长，确保设备内的化学药剂浓度降至安全范围以下，避免对后续的发酵过程和操作人员造成危害2.

• 清洗设备：通风换气后，用清水对发酵设备进行清洗，去除残留的化学药剂和可能产生的化学反应产物，然后再用无菌水冲洗一遍，确保设备内部干净无菌。

本厂闲置二手自吸式发酵罐