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PCR仪实验过程碰到这些问题,应该怎么办

时间:2024-09-30      阅读:489

基因扩增仪主要用于科研及临床的基因扩增、定性PCR基因扩增、荧光/酶免终点定量DNA基因扩增、基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增等。
光学检测系统:
1、光源:五个LED,各LED激发波长不同,保证每个通道的荧光素由优质的激发光激发
2、探测器:CCD,确保整板同时检测,数据间可比性强
3、激发波长范围:475nm-640nm
4、发射波长范围:520nm-740nm
5、五个检测通道:可同时能做四色检测
6、线性范围:11个数量级
7、灵敏度:可检测到单拷贝
PCR仪部分:
1、半导体模块加热制冷
2、样品容量:96孔
3、升温速率:>5℃/秒,降温速率>4.5℃/秒
4、温度精度:+/- 0.25℃
5、温度均一性:温度均一性:≤±0.3℃
6、温控范围:4℃-99.9℃
7、熔解曲线检测时,升降温速率可到0.01℃/sec可调
8、热盖温度:30℃-110℃可调
扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅:
常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系,与反应起始时RNA的总量及纯度有关,建议在试验中加入对照RNA。
第一链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10,建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。
目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:
a.将第一链的反应温度提高至50℃。
b.使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。
 
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