用试剂转染raw 264.7细胞怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题，特别对于10000左右质粒DNA的转染更是困难；我们实验室总结了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600025转染raw 264.7细胞一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。

下图是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片。

提高转染raw 264.7细胞条件如下

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent货号AD600025转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入*培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项：

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；

2细胞培养基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;

四、美国Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂信息：

五、RAW 264.7细胞简述：

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞. 此细胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。