SF17A昆虫细胞无血清培养基*

品名：SF17A昆虫细胞无血清培养基

货号：SF10105-2

规格：1L

价格：270元

产品介绍：

SF17A是一种适于昆虫细胞培养的无血清无蛋白培养基，含有Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氢钠。针对Sf9 、Sf21和High-Five 昆虫细胞系的无血清培养而开发和优化，适于通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达外源蛋白，使用该培养基可获得高滴度野生型AcNPV。细胞可以从无血清或者添加血清的培养基中直接转移到SF17A中进行传代培养，而无需经过适应。该培养基可以支持Sf9、Sf21和High-Five 细胞贴壁或者悬浮生长。Sf9 、Sf21和High-Five 细胞在SF17A培养基中通常可以达到1×10 7 cells/ml 的细胞密度，细胞活性大于95%，传代超过20 次而细胞活性不降低。

细胞复苏：

1.迅速将冻存的细胞放入37 度水浴中（<1min）。

2.将冻存管中的细胞转移到合适的培养容器中，用预热过的培养基将细胞稀释至0.5～0.8×106 cells/ml。

3.将细胞放入生化培养箱（无湿度、二氧化碳控制）中的摇床上，27±0.5°C ，90～120 rpm。

4.当细胞密度达到2×106 cells/ml 以上时进行传代培养。建议在蛋白或者病毒制备前细胞应至少传代三次以上。

细胞悬浮培养传代

昆虫细胞对剪切力非常敏感，必须保证搅拌培养过程中桨叶不能与容器壁或者容器底部接触。

1.使用自动或者半自动细胞计数仪，或者手动计数的方法测定细胞密度。

2.向无菌容器中加入预热的培养基，将细胞按照0.5～0.8×106 cells/ml 的密度接种其中（125ml 的摇瓶可以接种20～30 ml，100 ml 的转瓶（spinner bottle）可以接种50～75 ml）。

3.培养箱温度27±0.5°C ，不需要湿度和二氧化碳控制。

4.摇床转速90-120 rpm，转瓶搅拌转速设定为60～95 rpm（因仪器参数不同，建议在培养时对转速进行优

化）。

5.当细胞密度达到2×106 cells/ml 以上时，可以进行传代。

注意：如果观察到培养物中有细胞碎片，建议将细胞悬液100 g 离心5～10 min，弃上清，用新鲜培养基将细胞重悬，这样可减少细胞碎片和代谢副产物的积累。

注意：建议控制细胞培养代次，每隔一段时间需要重新复苏一支低代次的细胞

细胞贴壁培养传代

1.当细胞达到80~90%汇合度时，将培养上清去除。

2.添加4 mL 预热培养基（25 cm2），反复吹打制备细胞悬液。

3.观察细胞是否全部脱落。

4.如果部分细胞结团，将全部细胞转移到离心管中，静止1~2 min，细胞团会沉降到离心管的底部。用枪头轻轻碾压细胞团促使细胞分散。如果细胞团比较大，可以重以上步骤。用枪头吹打过重会造成细胞活性降低。

5.计数细胞密度。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接种到新培养瓶中，培养基按照5 mL/cm2 的量进行添加。

7.置于生化培养箱中培养，27±0.5°C ，不需要湿度和二氧化碳控制。

8.培养三天后将培养上清去除，靠近方瓶一侧将新鲜培养基缓慢添加到方瓶中。

注意：Sf9 细胞为非贴壁依赖型细胞，可以在贴壁培养和悬浮培养两种培养模式之间进行多次转换，而且细胞活性、形态和生长速率基本无区别。

将细胞适应至SF17A培养基中，在适应过程中，细胞活性非常重要，必须不低于90%，并处于对数生长中期。

直接悬浮适应

单层培养的细胞，只需要在传代时直接将培养基更换为SF17A。

按照以下步骤将悬浮培养的细胞转移至该培养基中：

1.将细胞悬液100×g 离心5～10 min，将上清去除。

2.使用预热过的SF17A培养基将细细胞重悬，细胞密度不低于8×105 cells/mL，转移至合适的容器中进行

培养。

3.置于培养箱中进行培养，监测细胞生长情况。

逐步适应

按照贴壁培养或悬浮培养传代方法和以下方法进行逐步适应。

1.在适应过程中细胞密度不低于0.8×106 cells/mL。

2.在传代培养过程中逐步增加SF17A培养基的比例，SF17A培养基与初始培养基的比例逐渐升高（25:75，

50:50，75:25，全部的SF17A）。在某个比例培养基中进行培养有可能要多次传代培养。

细胞冻存

1.准备处于对数生长中期的细胞，细胞活性>90%。

2.确定需要的细胞数量和冻存液体积，冻存液中细胞密度应达到0.5～1.0 × 107 cells/ml。

3.冻存液由82.5%SF17A，7.5% DMSO，10% 胎牛血清组成（血清也可以不添加）。冻存液4°C 保存。

4.将培养物100 g 离心6 min，去除上清，使用冻存液重悬细胞。

5.根据培养规模将细胞分装于合适的冻存管中，如4.5 ml～5.0 ml/支。

6.细胞可以在液氮中长期稳定保存，但不确定长保存期限。

SF17A昆虫细胞无血清培养基*货号及规格：

液体：

SF17A培养基，1L 液体，SF10105-2__