压力蒸汽灭菌器湿热引起蛋白质的变性比干热所需要的温度低且时间短，主要的物理去污控制作用之一是在一个密闭的小室(空间)里高压灭菌器产生湿热和高压。大多数情况，下列组合可以确保压力蒸汽灭菌器的灭菌效果。
 

　　压力蒸汽灭菌器应使用生物指示剂验证高压灭菌操作是否达到效果，当操作高压灭菌器时必须穿戴个人防护设备(简称PPE)如橡胶围裙和抗热防水的手套。压力蒸汽灭菌器里物品的放置应保证蒸汽能穿透至需消毒的所有部分，所以物品间不能靠得太紧或互相阻塞，否则不能保证灭菌效果，而且当从灭菌器中移出物品时由于受压严重可能引起(人身)伤害的危险。
 

　　压力蒸汽灭菌器标准操作规程：
 

　　1、目的为质检人员提供正确的操作方法。
 

　　2、适用范围：本规程适用于压力蒸汽灭菌器规定的压力、温度范围内稳定物质的灭菌。
 

　　3、职责：质检部门人员对本标准的实施负责。
 

　　4、操作程序
 

　　1)放置将待灭菌的物品有顺序地置于灭菌桶的筛架上，利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果。
 

　　2)加水在主体内加入清水3升，水位超过电热管，以免电热管被烧坏。连续使用时，必须在每次灭菌前补足上述水量。
 

　　3)密封将放置好物品的灭菌桶放在锅内，然后把盖上的放气软管插入灭菌桶内侧的半圆槽内，对正盖与锅内的螺栓槽，有序地将相对衬方的翼形螺母予以平衡旋紧，使盖与锅内密合。
 

　　4)加热：将压力蒸汽灭菌器接上与铭牌标志电压一致的电源，在加热开始时应将放气阀的摘子推至垂直“放气”位置，使空气随着加热阀逸去，待有较急的蒸汽喷出时，即将该摘子置于水平关闭位置，此时压力表指针随着加热逐渐上升，指示出灭菌器内的压力。
 

　　5)灭菌：当压力达到所需的范围，开始计算灭菌所需时间，并使之维持恒压。压力蒸汽灭菌器安全阀能使之维持恒压，如所需温度低于上述温度时，应在蒸汽压力达到所需范围时，适当调节电源开关，使在灭菌时间内维持恒压。
 

　　6)干燥：物品灭菌完毕时，须迅速干燥。然后将灭菌器内的蒸汽迅速排出，待压力表指针恢复到“零”位时，再稍等1～2分钟，将盖打开继续加热10～15分钟，使物品上残留水蒸汽得到蒸发，随后关闭电源，停止加热。
 

　　7)冷却：若是液体灭菌完毕时，切勿立即排出灭菌器内的蒸汽，由于液体的温度未能迅速下降，而压力蒸汽突然释放，会使液体剧烈沸腾造成溢出或容器炸裂等危险事故。